| 摘要 | 第1-3页 |
| Summary | 第3-7页 |
| 第一篇 文献综述 | 第7-17页 |
| 一、抗体研究进展 | 第8-11页 |
| 1 单克隆抗体 | 第8-9页 |
| 2 基因工程抗体 | 第9-11页 |
| ·嵌合抗体 | 第9页 |
| ·单链抗体 | 第9-10页 |
| ·抗独特型单克隆抗体 | 第10页 |
| ·抗体酶 | 第10-11页 |
| ·噬菌体抗体库技术 | 第11页 |
| ·功能性小分子抗体片断 | 第11页 |
| ·核糖体展示 | 第11页 |
| 二、免疫途径的改进 | 第11-13页 |
| 1. DNA免疫 | 第11-12页 |
| 2. 细胞免疫 | 第12页 |
| 3. 多位点重复免疫 | 第12-13页 |
| 三、口蹄疫诊断技术 | 第13-17页 |
| 1. 微量补体结合试验 | 第14页 |
| 2、间接夹心ELISA | 第14页 |
| 3、反向间接血凝试验 | 第14页 |
| 4、液相阻断-ELISA | 第14-15页 |
| 5、原位杂交 | 第15页 |
| 6、反转录-聚合酶链反应(RT-PCR) | 第15页 |
| 7、多重RT-PCR | 第15-16页 |
| 8. 酶联免疫吸附试验 | 第16-17页 |
| 第二篇 研究报告 | 第17-38页 |
| 一、材料 | 第17-19页 |
| 1 抗原、细胞株、动物 | 第17页 |
| 2 主要试剂 | 第17-18页 |
| ·细胞培养用试剂 | 第18页 |
| ·免疫学试剂 | 第18页 |
| ·其他生化试剂 | 第18页 |
| 3 主要仪器设备 | 第18-19页 |
| 二、方法 | 第19-27页 |
| 1 动物免疫，筛选方法的建立及小鼠效价测定 | 第19-20页 |
| ·动物免疫 | 第19页 |
| ·筛选方法的建立 | 第19-20页 |
| ·小鼠效价的测定 | 第20页 |
| 2. 杂交瘤细胞株的建立 | 第20-22页 |
| ·骨髓瘤细胞的准备 | 第20页 |
| ·饲养细胞的准备 | 第20-21页 |
| ·脾细胞的准备 | 第21页 |
| ·细胞的融合 | 第21-22页 |
| ·杂交瘤细胞的筛选 | 第22页 |
| ·杂交瘤细胞的克隆化培养 | 第22页 |
| 3. 杂交瘤细胞的扩大培养及冻存 | 第22-23页 |
| ·杂交瘤细胞的扩大培养 | 第22页 |
| ·杂交瘤细胞的冻存 | 第22-23页 |
| 4. 单克隆抗体的大量制备 | 第23页 |
| 5. 单克隆抗体的纯化 | 第23-24页 |
| ·饱和硫酸铵沉淀法 | 第23页 |
| ·Sephacryl S-300 HR层析法 | 第23-24页 |
| 6. 单克隆抗体的鉴定 | 第24-27页 |
| ·细胞培养上清和腹水效价测定 | 第24页 |
| ·抗体亚类鉴定 | 第24页 |
| ·杂交瘤细胞的染色体鉴定 | 第24-25页 |
| 杂交瘤细胞染色体计数步骤按照以下进行 | 第24-25页 |
| ·单克隆抗体的稳定性鉴定 | 第25页 |
| ·细胞体外传代试验 | 第25页 |
| ·连续冻存复苏试验 | 第25页 |
| ·腹水连续传代试验 | 第25-26页 |
| ·单克隆抗体的特异性 | 第26页 |
| ·单克隆抗体的位点分析 | 第26页 |
| ·单克隆抗体的SDS-PAGE电泳 | 第26-27页 |
| 三、结果 | 第27-34页 |
| 1 纯化抗原的蛋白含量测定 | 第27-28页 |
| 2 ELISA最佳抗原包被浓度和最佳血清稀释度的确定 | 第28页 |
| 3. 全部免疫小鼠抗体效价的检测 | 第28-29页 |
| 4 杂交瘤细胞株的建立 | 第29页 |
| 5 细胞培养液上清和腹水效价测定 | 第29页 |
| 6 单克隆抗体纯化结果 | 第29-30页 |
| 7 单克隆抗体的初步鉴定 | 第30-34页 |
| ·抗体亚类鉴定 | 第30-31页 |
| ·杂交瘤细胞的染色体计数结果 | 第31页 |
| ·杂交瘤细胞稳定性的鉴定 | 第31-33页 |
| ·单克隆抗体的特异性 | 第33页 |
| ·单克隆抗体的位点分析 | 第33-34页 |
| ·单克隆抗体的SDS-PAGE电泳 | 第34页 |
| 四、讨论 | 第34-37页 |
| 1 抗原的制备 | 第34-35页 |
| 2 动物免疫 | 第35页 |
| 3 细胞融合过程中应注意的几个问题 | 第35页 |
| 4 杂交瘤细胞株的筛选 | 第35-36页 |
| 5 腹水的制备 | 第36页 |
| 6 单克隆抗体的纯化 | 第36-37页 |
| 五、小结 | 第37-38页 |
| 第三篇 单抗的应用 | 第38-49页 |
| 一、材料 | 第38-39页 |
| 1、主要仪器 | 第38页 |
| 2、溶液 | 第38页 |
| 3、试剂和材料: | 第38-39页 |
| 二、方法 | 第39-42页 |
| 1 纯化后单克隆抗体效价和蛋白浓度的测定 | 第39页 |
| 2. 胶体金制备 | 第39-40页 |
| ·金标记抗体稳定点的调定 | 第39-40页 |
| ·金标记抗体制备 | 第40页 |
| 3. 测试条的制备和初步试验 | 第40-42页 |
| ·反应膜制备 | 第40页 |
| ·测试条的组装和切割 | 第40-42页 |
| 4. 测试条的初步试验 | 第42页 |
| 5. 金标试纸条的特异性试验 | 第42页 |
| 6. 金标试纸条的敏感性试验 | 第42页 |
| 7 金标试纸条的稳定性试验 | 第42页 |
| 8. 金标试纸条的田间试验 | 第42页 |
| 三、结果 | 第42-46页 |
| 1 单克隆抗体的纯化后效价测定 | 第42-43页 |
| 2 胶体金的制备 | 第43页 |
| 3 测试条的初步试验结果 | 第43-44页 |
| 4. 金标试纸条特异性试验结果 | 第44页 |
| 5 金标试纸条敏感性试验结果 | 第44-45页 |
| 7. Asia1型口蹄疫金标试纸条的完整形式 | 第45页 |
| 8. Asia1型口蹄疫金标试纸条田间试验 | 第45-46页 |
| 四、讨论 | 第46-48页 |
| 1 关于柠檬酸三钠还原法 | 第46页 |
| 2 制备胶体金及金标记抗体的注意事项 | 第46-47页 |
| 3 测试条的制备和试验 | 第47-48页 |
| 五、小结 | 第48-49页 |
| 结论 | 第49-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-58页 |
| 附录1 溶液的配制 | 第58-64页 |
| 一、细胞培养及筛选用溶液的配制 | 第58-59页 |
| 二、酶联免疫吸附试验(ELISA)使用试剂的配制 | 第59页 |
| 三、电泳使用试剂的配制 | 第59-60页 |
| 四、染色体核型分析用试剂的配制 | 第60-64页 |
| 作者简介 | 第64-65页 |
| 导师简介 | 第65-66页 |