| 摘要 | 第1-13页 |
| ABSTRACT | 第13-15页 |
| 1 引言 | 第15-35页 |
| ·禽流感国内外流行情况 | 第15-18页 |
| ·禽流感概述 | 第15页 |
| ·禽流感流行情况 | 第15-16页 |
| ·人禽流感流行情况 | 第16-18页 |
| ·AIV致病机制研究进展 | 第18-23页 |
| ·AIV方面 | 第18-22页 |
| ·宿主方面 | 第22-23页 |
| ·禽流感诊断技术的研究进展 | 第23-27页 |
| ·病原学检测方法 | 第24-25页 |
| ·血清学检测方法 | 第25-26页 |
| ·分子诊断技术 | 第26-27页 |
| ·real-time PCR的研究进展及其应用 | 第27-33页 |
| ·real-time PCR的概念、原理 | 第27-28页 |
| ·real-time PCR的种类 | 第28-30页 |
| ·real-time PCR技术的应用 | 第30-32页 |
| ·存在的问题及应用前景 | 第32-33页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第33-35页 |
| 2 材料与方法 | 第35-42页 |
| ·材料 | 第35-37页 |
| ·病毒、鸡胚和细胞 | 第35页 |
| ·实验动物 | 第35页 |
| ·试剂、耗材和仪器 | 第35页 |
| ·引物 | 第35-37页 |
| ·方法 | 第37-42页 |
| ·病毒增殖及RNA的提取 | 第37页 |
| ·cDNA的制备 | 第37页 |
| ·基因的克隆与鉴定 | 第37页 |
| ·序列测定及分析 | 第37-38页 |
| ·细胞培养和病毒感染 | 第38页 |
| ·红细胞凝集实验 | 第38页 |
| ·鸡胚接种 | 第38页 |
| ·间接免疫荧光染色 | 第38-39页 |
| ·real-time RT-PCR体系组成 | 第39页 |
| ·相对定量的计算 | 第39页 |
| ·鸡胚半数感染量(EID50)测定 | 第39-40页 |
| ·SPF鸡的感染性实验 | 第40页 |
| ·病毒滴定 | 第40页 |
| ·标准曲线绘制 | 第40页 |
| ·real-time RT-PCR反应体系的优化 | 第40页 |
| ·灵敏度、特异性和重复性实验 | 第40-41页 |
| ·real-time RT-PCR实验 | 第41页 |
| ·RT-PCR实验 | 第41页 |
| ·小鼠的致病性试验 | 第41页 |
| ·探针浓度的摸索 | 第41-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-72页 |
| ·靶基因的克隆及序列分析 | 第42-45页 |
| ·RT-PCR结果 | 第42-43页 |
| ·AIV各基因片段的克隆和序列分析 | 第43-45页 |
| ·不同亚型AIV在MDCK细胞上的生长特性 | 第45-49页 |
| ·细胞培养物的红细胞凝集实验 | 第45-46页 |
| ·AIV致MDCK细胞的病变效应 | 第46-47页 |
| ·间接免疫荧光结果 | 第47-48页 |
| ·鸡胚死亡情况 | 第48-49页 |
| ·鸡胚尿囊液的红细胞凝集实验 | 第49页 |
| ·不同亚型AIV在MDCK细胞上的表达差异的研究 | 第49-60页 |
| ·管家基因GAPDH标准曲线定量结果 | 第49-50页 |
| ·不同亚型AIV在MDCK细胞上的表达结果 | 第50-54页 |
| ·不同亚型AIV在鸡体内的表达结果 | 第54-60页 |
| ·Real-time RT-PCR技术检测AIV方法的建立及应用 | 第60-66页 |
| ·探针浓度的摸索 | 第60-61页 |
| ·标准曲线的确定 | 第61-62页 |
| ·灵敏度实验 | 第62-64页 |
| ·特异性实验 | 第64页 |
| ·重复性实验 | 第64-65页 |
| ·细胞培养物的检测结果 | 第65页 |
| ·实验样品的检测结果 | 第65-66页 |
| ·临床样品的检测结果 | 第66页 |
| ·Real-time RT-PCR技术检测H5亚型AIV方法的建立及应用 | 第66-72页 |
| ·标准曲线的确定 | 第66页 |
| ·灵敏度和重复性实验 | 第66-67页 |
| ·特异性实验 | 第67-69页 |
| ·细胞培养物的检测结果 | 第69页 |
| ·实验样品的检测结果 | 第69-71页 |
| ·临床样品的测定结果 | 第71-72页 |
| 4 讨论 | 第72-77页 |
| ·靶基因的克隆及序列分析 | 第72页 |
| ·不同亚型AIV在MDCK细胞上的生长特性 | 第72-73页 |
| ·不同亚型AIV在哺乳动物体内外表达差异的研究 | 第73-74页 |
| ·快速检测AIV的real-time RT-PCR方法的建立及应用 | 第74-75页 |
| ·快速检测H5亚型AIV的real-time RT-PCR方法的建立及应用 | 第75-77页 |
| 5 结论 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-90页 |
| 附录 | 第90-99页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第99页 |
