| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-12页 |
| 文献综述 | 第12-47页 |
| 第一章 转基因家禽研究进展 | 第12-38页 |
| 1 转基因家禽的发展潜力 | 第13-21页 |
| ·动物转基因研究的发展历程 | 第13-14页 |
| ·转基因动物的应用 | 第14-16页 |
| ·转基因家禽输卵管生物反应器的优势 | 第16-21页 |
| 2 家禽转基因操作面临的困境及可能战略 | 第21-38页 |
| ·家禽的生殖生理特性 | 第21-24页 |
| ·常规转基因动物技术简评及其在家禽转基因应用中的局限性 | 第24-34页 |
| ·家禽转基因的研究策略及发展趋势 | 第34-38页 |
| 第二章 HIV-1来源慢病毒载体 | 第38-47页 |
| 1 HIV的生物学特性 | 第38-42页 |
| ·HIV基本结构 | 第38-41页 |
| ·病毒的生活周期 | 第41-42页 |
| 2 病毒载体 | 第42-47页 |
| ·组成成分 | 第42-45页 |
| ·慢病毒载体安全性问题 | 第45-47页 |
| 实验部分 | 第47-115页 |
| 第一章 慢病毒载体介导绿色荧光蛋白基因在鸡体内的高效整合与表达 | 第47-74页 |
| 1 材料与方法 | 第48-61页 |
| ·慢病毒转运载体质粒的构建 | 第48页 |
| ·重组子的快速筛选及鉴定 | 第48-49页 |
| ·病毒辅助质粒的扩增鉴定 | 第49页 |
| ·293FT细胞的培养 | 第49-52页 |
| ·病毒的生产 | 第52页 |
| ·病毒滴度分析 | 第52-53页 |
| ·鸡胚胎成纤维细胞、鸡原始生殖细胞的获取 | 第53页 |
| ·病毒感染 | 第53-54页 |
| ·鸡胚病毒注射 | 第54页 |
| ·组织切片 | 第54-56页 |
| ·转基因鸡荧光观察 | 第56页 |
| ·鸡胚性别的早期鉴定 | 第56页 |
| ·转基因点杂交分析 | 第56-59页 |
| ·转基因个体PCR分析 | 第59页 |
| ·插入位点分析 | 第59-61页 |
| 2 结果 | 第61-70页 |
| ·病毒转运载体鉴定 | 第61-62页 |
| ·病毒包装质粒的扩增鉴定 | 第62-63页 |
| ·病毒滴度分析 | 第63页 |
| ·病毒感染后细胞表型的变化 | 第63页 |
| ·病毒在不同细胞内的表达特征 | 第63-65页 |
| ·转基因鸡的基因组分析 | 第65-66页 |
| ·绿色荧光蛋白在转基因鸡体内的表达 | 第66-68页 |
| ·鸡胚性别早期鉴定 | 第68-69页 |
| ·原病毒插入位点分析 | 第69-70页 |
| 3 讨论 | 第70-74页 |
| 第二章 组织型纤溶酶原激活剂在鸡体内的表达 | 第74-89页 |
| 1 材料与方法 | 第75-79页 |
| ·tPA基因的测序及序列比对 | 第75-76页 |
| ·tPA基因的扩增 | 第76页 |
| ·tPA基因信号肽分析 | 第76页 |
| ·慢病毒转运载体质粒的构建及检测 | 第76-77页 |
| ·病毒生产 | 第77页 |
| ·转基因鸡的制作与检测 | 第77-78页 |
| ·免疫荧光分析 | 第78页 |
| ·tPA活性检测 | 第78-79页 |
| 2 结果 | 第79-87页 |
| ·tPA基因的测序及序列比对 | 第79-82页 |
| ·tPA基因的扩增 | 第82页 |
| ·tPA基因信号肽分析 | 第82-83页 |
| ·表达tPA慢病毒转运质粒的鉴定 | 第83-84页 |
| ·病毒生产 | 第84页 |
| ·转基因鸡的制作与检测 | 第84-85页 |
| ·免疫荧光分析 | 第85-86页 |
| ·tPA活性分析 | 第86-87页 |
| 3 讨论 | 第87-89页 |
| 第三章 鸡输卵管特异/高效表达启动子筛选体系的建立 | 第89-115页 |
| 1 材料与方法 | 第90-95页 |
| ·SV40大T抗原基因及neo抗性基因的克隆 | 第90-92页 |
| ·卵清蛋白5'调控区的扩增 | 第92-93页 |
| ·表达SV40大T抗原慢病毒载体的构建 | 第93-94页 |
| ·输卵管特异表达载体的构建 | 第94页 |
| ·输卵上皮细胞原代培养 | 第94页 |
| ·输卵管上皮细胞永生化 | 第94-95页 |
| ·荧光定量RCR | 第95页 |
| ·不同启动子表达效率分析 | 第95页 |
| 2. 结果 | 第95-112页 |
| ·SV40大T抗原基因的扩增 | 第95-99页 |
| ·卵清蛋白5'调控区的扩增 | 第99-104页 |
| ·输卵管特异表达载体的构建 | 第104-105页 |
| ·表达SV40大T抗原慢病毒载体的构建 | 第105-106页 |
| ·输卵上皮细胞原代培养 | 第106-108页 |
| ·输卵管上皮细胞永生化 | 第108-109页 |
| ·荧光定量RCR | 第109-112页 |
| 3 讨论 | 第112-115页 |
| 参考文献 | 第115-123页 |
| 全文结论 | 第123-124页 |
| 创新之处 | 第124-125页 |
| 攻读学位期间发表及待发表的学术论文 | 第125-126页 |
| 致谢 | 第126页 |
