| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-25页 |
| 1 胡葱黄条病毒的研究进展 | 第15-18页 |
| ·SYSV 生物学特性 | 第16-18页 |
| ·寄主范围及危害症状 | 第16页 |
| ·株系的划分 | 第16-17页 |
| ·传播方式 | 第17页 |
| ·病毒粒子形态和细胞病理学特性 | 第17页 |
| ·血清学 | 第17页 |
| ·基因组特性 | 第17-18页 |
| ·基因组结构与编码蛋白的功能 | 第18页 |
| 2 马铃薯 Y 科病毒基于基因组序列的分类标准 | 第18-19页 |
| 3 酵母双杂交技术 | 第19-25页 |
| ·酵母双杂交系统的基本原理 | 第19-20页 |
| ·酵母双杂交系统在植物病毒学中的应用 | 第20-22页 |
| ·筛选与病毒作用的寄主蛋白 | 第21页 |
| ·确定已知蛋白之间的相互作用 | 第21-22页 |
| ·在病毒介体传播的分子机制研究中的应用 | 第22页 |
| ·酵母双杂交系统在植物病毒学中应用的展望 | 第22-25页 |
| 第二章 胡葱黄条病毒陕西洋葱分离物基因组 | 第25-58页 |
| 1 试验材料 | 第25-26页 |
| ·供试毒源 | 第25页 |
| ·菌种、质粒和试剂 | 第25-26页 |
| ·菌种与载体质粒 | 第25页 |
| ·试剂 | 第25页 |
| ·引物设计与合成 | 第25-26页 |
| 2 实验方法 | 第26-38页 |
| ·病毒提纯 | 第26-27页 |
| ·电子显微镜观察 | 第27-29页 |
| ·浸出法 | 第27页 |
| ·免疫电镜 | 第27-29页 |
| ·常规超薄切片 | 第29页 |
| ·RNA 提取 | 第29页 |
| ·逆转录合成第一链cDNA | 第29-30页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR) | 第30-31页 |
| ·克隆 | 第31-33页 |
| ·DNA 片段切胶纯化 | 第31页 |
| ·T-A 连接 | 第31页 |
| ·感受态细胞制备(CaCl2 法) | 第31-32页 |
| ·转化和筛选 | 第32页 |
| ·质粒提取 | 第32-33页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第33页 |
| ·序列测定和分析 | 第33页 |
| ·基于生物信息学方法的SYSV-O P3 蛋白跨膜结构域预测 | 第33页 |
| ·外源基因原核表达 | 第33-38页 |
| ·SYSV-O-CP 诱导表达及SDS-PAGE 检测 | 第34-35页 |
| ·抗血清制备 | 第35-37页 |
| ·Western blot 检测抗血清 | 第37-38页 |
| 3 结果分析 | 第38-58页 |
| ·电镜观察 | 第38-39页 |
| ·RNA 提取及检测 | 第39-40页 |
| ·SYSV-O 有关基因的RT-PCR 扩增 | 第40页 |
| ·SYSV-O 各基因的T-A 克隆 | 第40-41页 |
| ·SYSV-O cDNA 全序列 | 第41-47页 |
| ·SYSV-O 基因组结构分析 | 第47-51页 |
| ·SYSV-O 的基因组全序列结构特征 | 第47-48页 |
| ·编码蛋白结构特征 | 第48-49页 |
| ·序列分析 | 第49-51页 |
| ·SYSV-O P3 蛋白的跨膜结构预测 | 第51-53页 |
| ·利用Hydropathy plots 进行SYSV-O P3 疏水性图谱分析 | 第51-52页 |
| ·用TMHMM2.0 预测跨膜结构域 | 第52-53页 |
| ·SYSV-O CP 基因的原核表达 | 第53-58页 |
| ·SYSV-O CP 基因的扩增及连接T 载体 | 第53-54页 |
| ·CP 基因原核表达载体的构建 | 第54页 |
| ·CP 基因原核表达产物的SDS-PAGE 分析 | 第54-55页 |
| ·Western blot 检测SYSV-O CP | 第55-56页 |
| ·SYSV、LYSV 和OYDV CP 的血清学关系 | 第56-58页 |
| 第三章 与胡葱黄条病毒陕西洋葱分离物P3 蛋白互作的寄主蛋白筛选 | 第58-76页 |
| 1 材料与方法 | 第58-59页 |
| ·实验材料 | 第58-59页 |
| ·菌株与质粒 | 第58-59页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第59页 |
| ·引物 | 第59页 |
| 2 实验方法 | 第59-67页 |
| ·酵母菌株的活化 | 第59页 |
| ·酵母表型鉴定 | 第59-60页 |
| ·酵母双杂交载体pGBKT7-(SYSV-O) P3 的构建与表达 | 第60-63页 |
| ·酵母双杂交载体pGBKT7-(SYSV-O) P3 的构建 | 第60页 |
| ·酵母双杂交载体pGBKT7-(SYSV-O) P3 电击法转化酵母 AH109 | 第60-61页 |
| ·DNA-BD/(SYSV-O) P3 融合蛋白自激活作用检测 | 第61-62页 |
| ·DNA-BD/(SYSV-O) P3 融合蛋白对酵母菌AH109 的毒性检测 | 第62页 |
| ·DNA-BD/( SYSV-O) P3 融合蛋白的表达 | 第62-63页 |
| ·洋葱总RNA 的提取与检测 | 第63-65页 |
| ·Trizol 法提取总RNA | 第63页 |
| ·RNA 样品OD 值检测 | 第63页 |
| ·RNA 电泳检测 | 第63页 |
| ·第一链cDNA 合成 | 第63-64页 |
| ·LD-PCR 合成和扩增ds cDNA | 第64-65页 |
| ·酵母感受态细胞制备( LiAc 法) | 第65页 |
| ·洋葱ds cDNA 和Sma I 酶切后的pGADT7-Rec 共转化酵母菌株AH109 | 第65-66页 |
| ·阳性克隆的初步鉴定 | 第66页 |
| ·阳性克隆的进一步确证 | 第66页 |
| ·阳性克隆质粒的自激活检测 | 第66页 |
| ·回复杂交 | 第66页 |
| ·阳性克隆质粒与空载体pGBKT7 共转化 AH109 | 第66页 |
| ·阳性克隆质粒与pGBKT7-lam 共转化 AH109 | 第66页 |
| ·阳性克隆测序 | 第66-67页 |
| 3 结果与分析 | 第67-76页 |
| ·酵母菌株表型鉴定结果 | 第67页 |
| ·pGBKT7-(SYSV-O) P3 载体的构建及其在酵母中的表达检测 | 第67-69页 |
| ·目的基因的获得 | 第67-68页 |
| ·重组质粒pGBKT7-(SYSV-O) P3 的鉴定 | 第68-69页 |
| ·DNA-BD/(SYSV-O) P3 融合蛋白的自激活排除 | 第69页 |
| ·DNA-BD/(SYSV-O) P3 融合蛋白对酵母菌 AH109 的毒性检测 | 第69页 |
| ·酵母双杂交载体pGBKT7-(SYSV-O) P3 在酵母菌AH109 中的表达 | 第69-70页 |
| ·洋葱总RNA 的质量评定 | 第70-71页 |
| ·双链cDNA 的合成 | 第71页 |
| ·洋葱cDNA 文库的筛选 | 第71-73页 |
| ·阳性克隆的初步筛选 | 第71-72页 |
| ·阳性克隆的进一步验证 | 第72-73页 |
| ·测序结果与分析 | 第73页 |
| ·讨论 | 第73-76页 |
| 第四章 结论及进一步的研究建议 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 作者简介 | 第84页 |
