| 第一章 绪论 | 第1-42页 |
| 1 脂肪酶的研究进展 | 第14-28页 |
| ·脂肪酶的来源及产脂肪酶微生物的选育 | 第15-17页 |
| ·脂肪酶的结构及催化机理 | 第17-19页 |
| ·脂肪酶的性质 | 第19-21页 |
| ·脂肪酶的生产 | 第21-24页 |
| ·脂肪酶的应用 | 第24-28页 |
| 2 假单孢菌脂肪酶研究进展 | 第28-33页 |
| ·假单孢菌脂肪酶生化性质 | 第28-30页 |
| ·假单孢菌脂肪酶基因克隆 | 第30-31页 |
| ·假单孢菌脂肪酶基因表达调控 | 第31-32页 |
| ·假单孢菌脂肪酶分泌机制 | 第32-33页 |
| 3 毕赤酵母表达系统研究进展 | 第33-38页 |
| ·毕赤酵母表达宿主菌 | 第33-34页 |
| ·毕赤酵母表达载体 | 第34-35页 |
| ·外源基因的整合 | 第35页 |
| ·外源基因在毕赤酵母中的表达 | 第35-36页 |
| ·毕赤酵母表达系统的优化 | 第36-38页 |
| ·毕赤酵母表达系统的局限性 | 第38页 |
| 4 本研究的意义与目的 | 第38-42页 |
| ·本研究的意义 | 第38-41页 |
| ·本研究的目的 | 第41-42页 |
| 第二章 荧光假单孢菌脂肪酶基因的克隆 | 第42-54页 |
| 1 材料与方法 | 第42-50页 |
| ·菌种和载体 | 第42页 |
| ·工具酶和生化试剂 | 第42页 |
| ·试剂盒 | 第42页 |
| ·培养基及溶液配制 | 第42-44页 |
| ·常用仪器 | 第44页 |
| ·荧光假单孢菌基因组DNA的提取 | 第44-45页 |
| ·引物设计 | 第45-46页 |
| ·PCR扩增目的基因片段 | 第46页 |
| ·反向PCR扩增目的基因片段的上下游序列 | 第46-47页 |
| ·目的基因片段的回收 | 第47-48页 |
| ·PCR扩增基因片段与pGEM—T载体的连接 | 第48页 |
| ·E.coli DH5α感受态细胞制备及转化方法 | 第48-49页 |
| ·SDS碱裂解法小量制备质粒DNA | 第49-50页 |
| ·重组单克隆的PCR验证 | 第50页 |
| 2 结果与分析 | 第50-53页 |
| 3 讨论与小结 | 第53-54页 |
| 第三章 荧光假单孢菌脂肪酶基因的改造 | 第54-67页 |
| 1 材料与方法 | 第54-59页 |
| ·菌种和载体 | 第54页 |
| ·工具酶和生化试剂 | 第54页 |
| ·试剂盒 | 第54页 |
| ·培养基及溶液配制 | 第54页 |
| ·常用仪器 | 第54-55页 |
| ·基因合成示意图 | 第55-56页 |
| ·引物设计 | 第56页 |
| ·基因合成过程 | 第56-58页 |
| ·链延伸反应 | 第58页 |
| ·PCR | 第58-59页 |
| ·片段拼接反应 | 第59页 |
| ·目的基因片段序列测定 | 第59页 |
| 2 结果与分析 | 第59-65页 |
| ·脂肪酶改造基因PflipM的设计 | 第60-62页 |
| ·脂肪酶改造基因PflipM的合成 | 第62-65页 |
| 3 讨论与小结 | 第65-67页 |
| 第四章 荧光假单孢菌脂肪酶原始基因和改造基因在毕赤酵母中的表达 | 第67-95页 |
| 1 材料与方法 | 第67-79页 |
| ·菌种和载体 | 第67页 |
| ·工具酶和生化试剂 | 第67页 |
| ·试剂盒 | 第67页 |
| ·培养基及溶液配制 | 第67-69页 |
| ·仪器 | 第69页 |
| ·重组表达载体pPIC9K—PflipO的构建 | 第69-70页 |
| ·重组表达载体pPIC9K—PflipM的构建 | 第70-71页 |
| ·质粒DNA的大量提取 | 第71-72页 |
| ·重组表达载体的线性化 | 第72-73页 |
| ·毕赤酵母感受态的制备 | 第73页 |
| ·转化毕赤酵母 | 第73页 |
| ·重组毕赤酵母的筛选 | 第73-74页 |
| ·重组毕赤酵母的PCR验证 | 第74页 |
| ·目的基因在毕赤酵母中的表达 | 第74-75页 |
| ·重组脂肪酶的活力检测 | 第75-77页 |
| ·重组脂肪酶的酶学性质研究 | 第77-79页 |
| 2 结果与分析 | 第79-90页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第79-81页 |
| ·重组毕赤酵母的筛选和鉴定 | 第81-83页 |
| ·重组毕赤酵母的诱导表达 | 第83-85页 |
| ·重组脂肪酶的酶学性质研究 | 第85-90页 |
| 3 讨论与小结 | 第90-95页 |
| ·关于脂肪酶在毕赤酵母中的表达 | 第90-91页 |
| ·关于脂肪酶的活力测定 | 第91-92页 |
| ·关于脂肪酶的酶学性质 | 第92-95页 |
| 第五章 结论与工作设想 | 第95-97页 |
| 1 主要研究结论 | 第95-96页 |
| 2 本研究的创新点 | 第96页 |
| 3 下一步的工作设想 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-110页 |
| 致谢 | 第110-112页 |
| 附录 | 第112-118页 |