第一章 引言 | 第1-22页 |
·口蹄疫概况 | 第13页 |
·口蹄疫病毒 | 第13页 |
·牧草百脉根概况 | 第13-14页 |
·口蹄疫疫苗研究进展 | 第14-16页 |
·灭活疫苗 | 第14-15页 |
·弱毒活疫苗 | 第15页 |
·新型疫苗 | 第15-16页 |
·转基因植物疫苗研究概况 | 第16-21页 |
·基本原理 | 第16-17页 |
·表达载体的构建 | 第17页 |
·根癌农杆菌Ti质粒转化方法 | 第17-18页 |
·转基因植物疫苗国内外研究进展 | 第18-19页 |
·转基因植物疫苗存在问题及发展方向 | 第19-20页 |
·转基因植物的生物安全问题 | 第20-21页 |
·本研究的目的和意义 | 第21-22页 |
第二章 口蹄疫病毒Asial/YNBS/58株目的基因P12A、3C的克隆和序列分析 | 第22-29页 |
·材料与方法 | 第22-25页 |
·病毒与乳鼠 | 第22页 |
·载体及主要试剂 | 第22页 |
·引物 | 第22页 |
·病毒增殖 | 第22-23页 |
·病毒RNA提取 | 第23页 |
·cDNA合成 | 第23页 |
·P1-2A、3C基因的扩增 | 第23页 |
·P1-2A、3C基因的克隆与鉴定 | 第23-25页 |
·结果与分析 | 第25-26页 |
·P1-2A、3C基因的PCR扩增与鉴定 | 第25页 |
·重组质粒鉴定 | 第25-26页 |
·序列测定 | 第26页 |
·密码子偏好性分析 | 第26页 |
·讨论 | 第26-29页 |
第三章 口蹄疫病毒Asial/YNBS/58植物双元表达载体的构建 | 第29-35页 |
·材料和方法 | 第29-31页 |
·质粒和菌株 | 第29页 |
·试剂和工具酶 | 第29页 |
·主要仪器 | 第29页 |
·pcDNA3.1(+)-3C质粒载体的构建 | 第29-30页 |
·pcDNA3.1(+)-P12A-3C质粒载体的构建 | 第30-31页 |
·pBin438-P12A-3C质粒载体的构建 | 第31页 |
·三亲杂交法将pBin438-P12A-3C导入农杆菌 | 第31页 |
·农杆菌目的基因的PCR检测 | 第31页 |
·结果与分析 | 第31-32页 |
·口蹄疫病毒P12A-3C基因植物表达载体的构建与鉴定 | 第31-32页 |
·讨论 | 第32-35页 |
第四章 口蹄疫病毒免疫原基因P12A-3C在百脉根中的转化及阳性植株的鉴定 | 第35-42页 |
·材料和方法 | 第35-38页 |
·种子和转化载体 | 第35页 |
·主要试剂及仪器 | 第35页 |
·培养基、激素及抗生素 | 第35-36页 |
·种子消毒方法 | 第36页 |
·百脉根遗传转化 | 第36-37页 |
·未转化植株的组织培养 | 第37页 |
·PCR法检测外源基因的整合 | 第37页 |
·RT-PCR法检测外源基因的整合 | 第37-38页 |
·表达蛋白的ELISA检测 | 第38页 |
·结果与分析 | 第38-39页 |
·讨论 | 第39-42页 |
第五章 转基因植株的动物免疫试验 | 第42-46页 |
·材料和方法 | 第42-43页 |
·植物材料和实验动物 | 第42页 |
·主要试剂 | 第42页 |
·疫苗的制备及免疫剂量 | 第42页 |
·动物免疫 | 第42-43页 |
·抗体监测 | 第43页 |
·结果与分析 | 第43-44页 |
·抗体的动态变化 | 第43-44页 |
·讨论 | 第44-46页 |
第六章 全文总结 | 第46-47页 |
参考文献 | 第47-56页 |
致谢 | 第56-57页 |
作者简历 | 第57-58页 |
附录: | 第58-64页 |