英文缩写表 | 第1-8页 |
摘要 | 第8-10页 |
ABSTRACT | 第10-12页 |
1 前言 | 第12-35页 |
·真菌毒素 | 第12页 |
·黄曲霉毒素 | 第12-13页 |
·黄曲霉毒素的产生 | 第13页 |
·黄曲霉毒素的性质 | 第13-15页 |
·黄曲霉的毒性 | 第15-16页 |
·黄曲霉的致癌性 | 第16页 |
·真菌毒素对农产品的污染 | 第16-17页 |
·食品中黄曲霉毒素含量安全标准 | 第17页 |
·黄曲霉毒素的检测 | 第17-18页 |
·抗原免疫特性 | 第18-19页 |
·抗体产生理论基础 | 第19-20页 |
·抗体的产生 | 第19页 |
·抗体的多样性 | 第19页 |
·抗体的体内成熟 | 第19-20页 |
·抗体发展 | 第20-22页 |
·基因工程抗体类型 | 第22-23页 |
·鼠源单抗人源化 | 第22页 |
·小分子抗体ScFv、Fab、F(ab’)~2、Fv | 第22-23页 |
·小分子抗体的特点与意义 | 第23-24页 |
·单链抗体的构建 | 第24页 |
·单链抗体的表达载体 | 第24-25页 |
·单链抗体的可溶性表达 | 第25-26页 |
·基因工程抗体的应用 | 第26-27页 |
·丝状噬菌体生物学特性 | 第27页 |
·噬菌体表面展示技术的原理与方法 | 第27-28页 |
·噬菌体抗体库淘洗富集的原理与方法 | 第28-29页 |
·噬菌体抗体库技术原理与特点 | 第29页 |
·噬菌体展示技术的意义 | 第29-30页 |
·ELISA原理 | 第30页 |
·ELISA检测方法的类型 | 第30-31页 |
·ELISA检测中的酶与底物的作用 | 第31-33页 |
·ELISA在食品检测中的应用 | 第33-34页 |
·基因工程抗体应用展望 | 第34-35页 |
2 材料与方法 | 第35-54页 |
·试验材料 | 第35-38页 |
·细胞及细胞株 | 第35页 |
·质粒载体 | 第35页 |
·PCR引物 | 第35-36页 |
·试剂与材料 | 第36-37页 |
·仪器 | 第37-38页 |
·试验方法 | 第38-54页 |
·免疫小鼠 | 第38页 |
·测小鼠血清效价 | 第38-39页 |
·提取小鼠脾脏总RNA | 第39-40页 |
·RT合成第一条链cDNA | 第40-41页 |
·分别扩增重链VH、轻链VL基因和连接多肽LINKER | 第41-42页 |
·扩增scFv DNA | 第42-43页 |
·Sfi Ⅰ/Not Ⅰ酶切scFv DNA片段及回收 | 第43页 |
·Sfi Ⅰ/Not Ⅰ酶切pQY1.5质粒 | 第43-44页 |
·构建重组质粒pCANTAB 5E-scFv | 第44页 |
·电击转化构建抗体库 | 第44-46页 |
·制备重组噬菌体 | 第46-47页 |
·滴定重组噬菌体的库容量 | 第47-48页 |
·单链抗体噬菌体抗体库的淘洗与富集 | 第48页 |
·用间接ELISA检测与AFB1-BSA蛋白有特异性的单链抗体 | 第48-50页 |
·单链抗体诱导表达与可溶性抗体的检测 | 第50-51页 |
·噬菌体抗体库竞争ELISA检测 | 第51-52页 |
·单克隆抗体试剂盒检测花生中AFB1的含量 | 第52-54页 |
3 结果与分析 | 第54-64页 |
·免疫小鼠血清效价的鉴定 | 第54-55页 |
·评价免疫小鼠脾脏RNA质量 | 第55-56页 |
·V_H、V_(JK-MIX)基因的扩增 | 第56-57页 |
·scFv基因的扩增与组装 | 第57页 |
·单链抗体抗体库的构建 | 第57-58页 |
·单链抗体噬菌体抗体库的检测 | 第58-59页 |
·单链抗体可溶性表达的检测 | 第59-60页 |
·噬菌体抗体库竞争ELISA检测 | 第60-61页 |
·花生中黄曲霉毒素的检测 | 第61-64页 |
4 结论 | 第64-65页 |
参考文献: | 第65-70页 |
附录1 | 第70-71页 |
附录2 | 第71-73页 |
致谢 | 第73页 |