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花生黄曲霉毒素B1单链抗体的研制及其检测

英文缩写表第1-8页
摘要第8-10页
ABSTRACT第10-12页
1 前言第12-35页
   ·真菌毒素第12页
   ·黄曲霉毒素第12-13页
   ·黄曲霉毒素的产生第13页
   ·黄曲霉毒素的性质第13-15页
   ·黄曲霉的毒性第15-16页
   ·黄曲霉的致癌性第16页
   ·真菌毒素对农产品的污染第16-17页
   ·食品中黄曲霉毒素含量安全标准第17页
   ·黄曲霉毒素的检测第17-18页
   ·抗原免疫特性第18-19页
   ·抗体产生理论基础第19-20页
     ·抗体的产生第19页
     ·抗体的多样性第19页
     ·抗体的体内成熟第19-20页
   ·抗体发展第20-22页
   ·基因工程抗体类型第22-23页
     ·鼠源单抗人源化第22页
     ·小分子抗体ScFv、Fab、F(ab’)~2、Fv第22-23页
   ·小分子抗体的特点与意义第23-24页
   ·单链抗体的构建第24页
   ·单链抗体的表达载体第24-25页
   ·单链抗体的可溶性表达第25-26页
   ·基因工程抗体的应用第26-27页
   ·丝状噬菌体生物学特性第27页
   ·噬菌体表面展示技术的原理与方法第27-28页
   ·噬菌体抗体库淘洗富集的原理与方法第28-29页
   ·噬菌体抗体库技术原理与特点第29页
   ·噬菌体展示技术的意义第29-30页
   ·ELISA原理第30页
   ·ELISA检测方法的类型第30-31页
   ·ELISA检测中的酶与底物的作用第31-33页
   ·ELISA在食品检测中的应用第33-34页
   ·基因工程抗体应用展望第34-35页
2 材料与方法第35-54页
   ·试验材料第35-38页
     ·细胞及细胞株第35页
     ·质粒载体第35页
     ·PCR引物第35-36页
     ·试剂与材料第36-37页
     ·仪器第37-38页
   ·试验方法第38-54页
     ·免疫小鼠第38页
     ·测小鼠血清效价第38-39页
     ·提取小鼠脾脏总RNA第39-40页
     ·RT合成第一条链cDNA第40-41页
     ·分别扩增重链VH、轻链VL基因和连接多肽LINKER第41-42页
     ·扩增scFv DNA第42-43页
     ·Sfi Ⅰ/Not Ⅰ酶切scFv DNA片段及回收第43页
     ·Sfi Ⅰ/Not Ⅰ酶切pQY1.5质粒第43-44页
     ·构建重组质粒pCANTAB 5E-scFv第44页
     ·电击转化构建抗体库第44-46页
     ·制备重组噬菌体第46-47页
     ·滴定重组噬菌体的库容量第47-48页
     ·单链抗体噬菌体抗体库的淘洗与富集第48页
     ·用间接ELISA检测与AFB1-BSA蛋白有特异性的单链抗体第48-50页
     ·单链抗体诱导表达与可溶性抗体的检测第50-51页
     ·噬菌体抗体库竞争ELISA检测第51-52页
     ·单克隆抗体试剂盒检测花生中AFB1的含量第52-54页
3 结果与分析第54-64页
   ·免疫小鼠血清效价的鉴定第54-55页
   ·评价免疫小鼠脾脏RNA质量第55-56页
   ·V_H、V_(JK-MIX)基因的扩增第56-57页
   ·scFv基因的扩增与组装第57页
   ·单链抗体抗体库的构建第57-58页
   ·单链抗体噬菌体抗体库的检测第58-59页
   ·单链抗体可溶性表达的检测第59-60页
   ·噬菌体抗体库竞争ELISA检测第60-61页
   ·花生中黄曲霉毒素的检测第61-64页
4 结论第64-65页
参考文献:第65-70页
附录1第70-71页
附录2第71-73页
致谢第73页

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