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核盘菌致病力衰退相关真菌病毒(SsDRV)全长cDNA克隆及侵染性cDNA转化载体的构建

摘要第1-8页
ABSTRACT第8-10页
缩略词表第10-11页
第一章 文献综述第11-22页
 1 真菌病毒概况第11-15页
   ·真菌病毒分类现状第11页
   ·真菌病毒的传播特性及相关研究第11-13页
     ·真菌病毒的传播概况第11-12页
     ·影响真菌病毒传播的因子第12页
     ·真菌病毒传播的相关研究第12-13页
   ·真菌病毒对寄主真菌的影响及互作第13-15页
 2 真菌病毒生物防治应用相关研究第15页
 3 核盘菌中的真菌病毒第15-20页
   ·核盘菌与菌核病第15-18页
     ·核盘菌分类地位及危害情况第15-16页
     ·核盘菌侵染循环以及致病机理第16-17页
     ·菌核病防治情况第17-18页
   ·核盘菌重寄生真菌盾壳霉第18-19页
     ·盾壳霉概况第18页
     ·盾壳霉在菌核病防治中的应用第18-19页
   ·核盘菌EP-1PN菌株中的SSDRV第19-20页
     ·Ep-1PN菌株研究背景第19页
     ·SsDRV对油菜菌核病的生防潜能及存在的问题第19-20页
   ·盾壳霉传播SSDRV的可能性第20页
 4 农杆菌介导的真菌遗传转化研究进展第20-21页
 5 本研究的目的和意义第21-22页
第二章 核盘菌真菌病毒SSDRV基因组CDNA克隆及序列分析第22-35页
 1 材料和方法第22-27页
   ·材料第22-23页
     ·菌株及培养方法第22页
     ·载体、Race用oligo接头、引物和电泳用分子量标记第22-23页
     ·试剂及培养基第23页
     ·酶及其它药品、试剂第23页
   ·方法第23-27页
     ·Ep-1PN菌株培养和菌丝收集第23-24页
     ·病毒dsRNA的提取第24页
     ·病毒dsRNA样品去DNA处理及回收纯化第24页
     ·通过RACE获得SsDRV5’末端cDNA第24-26页
     ·SsDRV5’末端序列测定第26-27页
       ·目的片段的回收纯化和载体连接第26页
       ·热激发大肠杆菌感受态的制备第26页
       ·热击转化和质粒筛选、提取第26-27页
     ·序列拼接及分析第27页
 2 结果与分析第27-33页
   ·病毒DSRNA提取第27-28页
   ·SSDRV基因组CDNA5’末端RACE第28页
   ·SSDRV基因组序列拼接第28页
   ·SSDRV基因组序列推定蛋白质功能分析第28页
   ·SSDRV编码的甲基转移酶、解螺旋酶和RDRP同源性比较第28-33页
 3.问题和讨论第33-35页
第三章 真菌病毒SSDRV侵染性CDNA转化载体构建第35-45页
 1.材料和方法第35-41页
   ·材料第35-37页
     ·菌株、载体及引物第35-36页
     ·试剂及培养基第36页
     ·试剂盒及抗生素第36-37页
   ·方法第37-41页
     ·全长cDNA阳性克隆的获取第37页
     ·含双trpC启动子的丝状真菌转化载体的构建第37-40页
     ·含重组质粒农杆菌的获取第40页
       ·农杆菌感受态的制备及热击转化第40页
       ·农杆菌质粒的酶切鉴定第40页
     ·农杆菌介导转化盾壳霉第40-41页
 2.结果与分析第41-43页
   ·SSDRV全长CDNA的获取第41-42页
   ·转化盾壳霉载体构建及鉴定第42页
   ·含重组质粒农杆菌和鉴定第42页
   ·农杆菌介导盾壳霉转化第42-43页
 3.问题和讨论第43-45页
研究展望第45-46页
参考文献第46-57页
附录1:SSDRV全基因组及编码氨基酸序列第57-61页
附录2:已发表的相关论文第61-62页
致谢第62页

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