| 独创性声明 | 第1页 |
| 关于学位论文使用授权的说明 | 第3-4页 |
| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 文献综述 | 第9-29页 |
| 第一章 猪瘟及猪瘟病毒的研究进 | 第9-21页 |
| 1 猪瘟及猪瘟病毒概述 | 第9-10页 |
| 2 猪瘟病毒基因组结构及研究进展 | 第10-15页 |
| ·猪瘟病毒基因组结构 | 第10-11页 |
| ·猪瘟病毒基因组非编码区的研究进展 | 第11-12页 |
| ·猪瘟病毒基因组编码区各基因的研究进展 | 第12-15页 |
| 3 猪瘟病毒的增殖及细胞培养 | 第15-18页 |
| ·猪瘟病毒的入侵及增殖 | 第15-16页 |
| ·猪瘟病毒对宿主细胞的致病机理 | 第16页 |
| ·猪瘟病毒的细胞培养 | 第16-18页 |
| 4 猪瘟疫苗研究进展 | 第18-21页 |
| ·猪瘟的传统疫苗 | 第18页 |
| ·新型猪瘟疫苗 | 第18-21页 |
| 第二章 RNA病毒反向遗传操作技术研究进展及其在猪瘟病毒研中的应用 | 第21-29页 |
| 1 RNA病毒反向遗传操作技术研究进展 | 第21-27页 |
| ·RNA病毒反向遗传系统的构建原则 | 第21-22页 |
| ·构建基因组感染性cDNA克隆的方法 | 第22-24页 |
| ·影响全长cDNA克隆感染性的因素 | 第24-25页 |
| ·RNA病毒反向遗传操作技术的应用 | 第25-26页 |
| ·小结 | 第26-27页 |
| 2 反向遗传技术在猪瘟病毒研究中的应用概况 | 第27-28页 |
| 3 实验研究目的与意义 | 第28-29页 |
| 研究报告 | 第29-47页 |
| 第三章 猪瘟兔化弱毒疫苗株全基因组序列测定与分析 | 第29-35页 |
| 1 材料与方法 | 第29-31页 |
| ·毒株 | 第29页 |
| ·实验试剂和细菌 | 第29页 |
| ·引物设计与合成 | 第29-30页 |
| ·病毒RNA的提取 | 第30页 |
| ·RT-PCR扩增9条cDNA片段 | 第30-31页 |
| ·PCR产物与pMD-18T载体的克隆 | 第31页 |
| ·重组质粒的提取和鉴定 | 第31页 |
| ·全基因组序列测定与分析 | 第31页 |
| 2 实验结果 | 第31-33页 |
| ·RT-PCR扩增各cDNA片段 | 第31页 |
| ·HCLV基因组cDNA片段的克隆及序列测定 | 第31-32页 |
| ·HCLV与CSFV其它毒株基因组全序列遗传进化树分析和同源性比较 | 第32-33页 |
| 3 讨论 | 第33-35页 |
| 第四章 构建猪瘟兔化弱毒疫苗株全长cDNA克隆 | 第35-41页 |
| 1 材料与方法 | 第35-36页 |
| ·毒株 | 第35页 |
| ·实验试剂和细菌 | 第35页 |
| ·引物 | 第35页 |
| ·病毒RNA的提取、RT-PCR及克隆 | 第35页 |
| ·基因组末端cDNA片段的修饰 | 第35-36页 |
| ·全基因组cDNA的连接与克隆 | 第36页 |
| 2 实验结果 | 第36-39页 |
| ·HCLV株基因组cDNA片段扩增 | 第36-37页 |
| ·基因组末端cDNA片段5'UTR和3'UTR的修饰 | 第37页 |
| ·构建基因组全长cDNA克隆中重组质粒的酶切鉴定 | 第37-39页 |
| 3 讨论 | 第39-41页 |
| ·全基因组测序及改造 | 第39页 |
| ·分段扩增基因组cDNA | 第39页 |
| ·连接和克隆策略 | 第39页 |
| ·获得稳定的基因组克隆 | 第39-40页 |
| ·基因组末端cDNA片段5'UTR和3'UTR的扩增与修饰 | 第40-41页 |
| 第五章 对猪瘟兔化弱毒疫苗株全长cDNA克隆的改造 | 第41-47页 |
| 1 材料与方法 | 第41-42页 |
| ·菌种和质粒 | 第41页 |
| ·实验试剂 | 第41页 |
| ·在基因组中N~(pro)部位插入外源基因 | 第41页 |
| ·猪瘟兔化弱毒疫苗株与猪瘟石门强毒株病毒基因的替换 | 第41-42页 |
| ·HCLV干扰缺损颗粒亚基因组克隆的构建 | 第42页 |
| ·真核启动子控制下的重组质粒pOKCIHCLV的构建 | 第42页 |
| 2 实验结果 | 第42-45页 |
| ·EGFP和EIAVep在pOKHCLV中的插入 | 第42-43页 |
| ·猪瘟兔化弱毒疫苗株与猪瘟石门强毒株的替换获得分子克隆 | 第43-44页 |
| ·重组质粒pOKHCLVdel4764的获得 | 第44页 |
| ·重组质粒pOKCIHCLV的获得 | 第44-45页 |
| 3 讨论 | 第45-47页 |
| ·N~(pro)部位插入EGFP和EIAVep | 第45页 |
| ·猪瘟病毒的干扰缺损颗粒 | 第45-46页 |
| ·重组质粒pOKCIHCLV与DNA疫苗 | 第46-47页 |
| 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 作者简历 | 第58页 |
