| 文献综述 | 第1-14页 |
| 前言 | 第14-16页 |
| 第一章 微小牛蜱Bm86基因的克隆及在毕赤酵母中的真核表达 | 第16-40页 |
| 摘要 | 第16-17页 |
| Abstract | 第17-18页 |
| 材料和方法 | 第18-40页 |
| 1.实验材料 | 第18-19页 |
| ·蜱种、菌种和载体 | 第18页 |
| ·酶和试剂 | 第18页 |
| ·微小牛蜱 Bm86 基因的引物设计 | 第18页 |
| ·培养基 | 第18-19页 |
| ·溶液 | 第19页 |
| ·仪器与设备 | 第19页 |
| 2.实验方法 | 第19-29页 |
| ·微小牛蜱总 RNA 的提取 | 第19-21页 |
| ·目的基因 Bm86 的扩增 | 第21页 |
| · PCR 产物的回收 | 第21-22页 |
| ·目的基因的克隆 | 第22-23页 |
| ·重组克隆质粒的提取与鉴定 | 第23-24页 |
| ·毕赤酵母重组表达载体的构建 | 第24页 |
| ·重组载体 pPIC9K-P2 电转化毕赤酵母 GS115 | 第24-25页 |
| ·重组酵母菌株的筛选 | 第25-26页 |
| ·重组酵母菌株的诱导表达 | 第26页 |
| ·表达产物的初步纯化、检测和鉴定 | 第26-29页 |
| 3.实验结果 | 第29-35页 |
| ·目的基因 Bm86 的获得 | 第29-32页 |
| ·毕赤酵母重组表达载体 pPIC9K-Bm86 的构建及鉴定 | 第32-33页 |
| · 重组表达载体 pPIC9K-Bm86 电转化毕赤酵母宿主菌 | 第33页 |
| ·重组毕赤酵母菌株的筛选 | 第33-34页 |
| ·表达产物的检测及鉴定结果 | 第34-35页 |
| 4.讨论 | 第35-40页 |
| ·目的基因 Bm86 的克隆 | 第35页 |
| ·毕赤酵母重组表达载体 pPIC9K-Bm86 的构建 | 第35页 |
| ·毕赤巴斯德酵母在外源蛋白生产中的优势 | 第35-37页 |
| ·表达载体与宿主染色体的整合 | 第37页 |
| ·问题与展望 | 第37-40页 |
| 第二章 微小牛蜱cDNA表达文库的构建 | 第40-51页 |
| 摘要 | 第40页 |
| 1 材料与方法 | 第40-48页 |
| ·试验材料 | 第40-41页 |
| ·实验方法 | 第41-48页 |
| 2 结果 | 第48-50页 |
| · 总 RNA 的检测 | 第48-49页 |
| · mRNA的检测 | 第49页 |
| ·双链 cDNA 的检测 | 第49页 |
| · cDNA 文库库容量 | 第49-50页 |
| 3.讨论 | 第50-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-59页 |
| 个人简介 | 第59-60页 |
| 导师简介 | 第60-61页 |
| 独创性声明 | 第61页 |
