| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-13页 |
| 前言 | 第13-19页 |
| 1.树突状细胞疫苗的现状 | 第13-17页 |
| ·树突状细胞的组成 | 第13页 |
| ·树突状细胞的起源和分类 | 第13-14页 |
| ·树突状细胞的生物学特性 | 第14-15页 |
| ·树突状细胞的获取和培养 | 第15-16页 |
| ·树突状细胞在肿瘤免疫治疗中的应用 | 第16-17页 |
| 2.人端粒酶逆转录酶的研究现状 | 第17-18页 |
| 3.蛋白转导技术 | 第18页 |
| 4.思路 | 第18-19页 |
| 正文 | 第19-64页 |
| 第一章 hTERT I540-PTD融合基因表达框的设计和构建 | 第19-31页 |
| ·实验材料 | 第19-20页 |
| ·主要试剂 | 第19页 |
| ·仪器设备 | 第19页 |
| ·重要试剂的配制 | 第19-20页 |
| ·实验方法 | 第20-25页 |
| ·I540-PTD和I540-PTD4融合基因的设计 | 第20页 |
| ·I540-PTD和I540-PTD4融合基因的拼接 | 第20-25页 |
| ·实验结果 | 第25-29页 |
| ·I540-PTD和I540-PTD的氨基酸序列和核苷酸序列 | 第25-26页 |
| ·pSP72-I540-PTD和pSP72-I540-PTD4的测序结果 | 第26-28页 |
| ·pSP72-I540-PTD和pSP72-I540-PTD4质粒图谱 | 第28-29页 |
| ·讨论 | 第29-31页 |
| 第二章 携带hTERT I540-PTD表达框的重组腺病毒的构建和鉴定 | 第31-43页 |
| ·实验材料 | 第31页 |
| ·主要试剂 | 第31页 |
| ·仪器设备 | 第31页 |
| ·实验方法 | 第31-37页 |
| ·携带I540-PTD和I540-PTD4表达框的穿梭质粒构建 | 第31-33页 |
| ·复制缺陷型重组腺病毒的制备 | 第33-34页 |
| ·复制缺陷型重组腺病毒的扩增 | 第34页 |
| ·复制缺陷型重组腺病毒的纯化 | 第34页 |
| ·复制缺陷型重组腺病毒滴度测定 | 第34-35页 |
| ·复制缺陷型重组腺病毒的鉴定 | 第35-37页 |
| ·实验结果 | 第37-41页 |
| ·pDC315-I540-PTD和pDC315-I540-PTD4的酶切鉴定结果 | 第37页 |
| ·pDC315-I540-PTD和pDC315-I540-PTD4质粒图谱 | 第37-38页 |
| ·HEK293的细胞病变反应 | 第38-39页 |
| ·Ad-I540-PTD和Ad-I540-PTD4病毒滴度的测定 | 第39页 |
| ·Ad-I540-PTD和Ad-I540-PTD4的PCR鉴定 | 第39-40页 |
| ·Ad-I540-PTD和Ad-I540-PTD4的表达鉴定 | 第40-41页 |
| ·讨论 | 第41-43页 |
| ·基于Cre-LoxP系统的重组复制缺陷型腺病毒的制备方法 | 第41页 |
| ·重组腺病毒的滴度测定 | 第41页 |
| ·基因疫苗的优越性 | 第41页 |
| ·影响基因疫苗免疫效能的因素 | 第41-43页 |
| 第三章 Ad-I540-PTD体外诱发抗肿瘤免疫能力的测定 | 第43-52页 |
| ·实验材料 | 第43页 |
| ·主要试剂 | 第43页 |
| ·仪器设备 | 第43页 |
| ·重要试剂的配制 | 第43页 |
| ·实验方法 | 第43-45页 |
| ·人外周血定向诱导分化和培养树突状细胞 | 第43-44页 |
| ·树突状细胞的转染 | 第44页 |
| ·DC诱导自体混合T淋巴细胞增殖分化为细胞毒性T淋巴细胞CTL | 第44页 |
| ·TNF-α释放试验 | 第44页 |
| ·Cr~51释放实验 | 第44-45页 |
| ·统计学方法 | 第45页 |
| ·实验结果 | 第45-50页 |
| ·树突状细胞的形态学观察 | 第45-46页 |
| ·转染后树突状细胞刺激自体淋巴细胞增殖能力的测定 | 第46-47页 |
| ·TNF-α释放试验 | 第47-48页 |
| ·Cr~(51)释放实验 | 第48-50页 |
| ·讨论 | 第50-52页 |
| ·基因疫苗的接种方式 | 第50页 |
| ·CTL活性的测定方法 | 第50页 |
| ·使用树突状细胞获得高效抗肿瘤免疫力 | 第50-52页 |
| 结论 | 第52-53页 |
| 展望 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-64页 |
| 文献综述 | 第64-80页 |
| 蛋白转导功能域的研究现状及应用 | 第64-80页 |
| 1.蛋白转导技术和蛋白转导功能域 | 第64-68页 |
| ·HIV-1 TAT | 第64-66页 |
| ·HSV VP22 | 第66页 |
| ·果蝇触角足蛋白转导功能域(pANTP-PTD) | 第66-67页 |
| ·人工合成的具有蛋白转导活性的肽 | 第67-68页 |
| 2.蛋白转导技术在肿瘤基因治疗中的应用 | 第68-69页 |
| ·酶解前体药策略 | 第68-69页 |
| ·p53基因治疗 | 第69页 |
| 3.蛋白转导功能域在肿瘤疫苗领域的应用 | 第69-72页 |
| ·HIV-1 TAT-PTD | 第69-71页 |
| ·HSV-1 VP22 | 第71页 |
| ·pANTP-PTD | 第71-72页 |
| 4.参考文献 | 第72-80页 |
| 附录 | 第80-82页 |
| 成果 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
