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衣原体RNase H Ⅱ编码基因的克隆与表达及酶的纯化与性质鉴定

致谢第1-6页
中英文对照第6-7页
中文摘要第7-9页
英文摘要第9-11页
1 前言第11-26页
   ·衣原体生物学进展第11-14页
   ·RNase H 的研究进展第14-24页
     ·RNase H 的分类第14-15页
     ·RNase H 结构与功能的研究进展第15-16页
     ·RNase H 的功能第16-24页
       ·复制过程中DNA滞后链引物的切除第16-18页
       ·DNA 修复功能第18-22页
       ·RNase H 的转录功能第22-23页
       ·逆转录酶的 RNase H 结构域的功能第23-24页
   ·RNase H 的应用第24页
     ·一种独特的DNA扩增方法第24页
     ·设计反义的寡聚脱氧核糖核酸药物第24页
     ·研究病毒的致病机理及抗病毒的药物第24页
   ·课题研究意义第24-26页
2 材料与方法第26-32页
   ·材料第26页
   ·衣原体 RNase HⅡ编码基因的克隆、表达及酶的纯化第26-29页
     ·PCR 扩增衣原体RNase HⅡ的编码基因第26-27页
     ·表达质粒pET28aCpRNaseHⅡa 和pET28aCpRNaseHⅡb 的构建第27页
     ·衣原体 RNase HⅡ基因的表达第27页
     ·衣原体 RNase HⅡ的纯化第27-29页
       ·变性Ni-NTA亲和纯化和蛋白质复性第28页
       ·非变性Ni-NTA亲和纯化第28-29页
     ·蛋白含量测定的Bandfird方法第29页
   ·衣原体RNase HⅡ的功能鉴定第29-32页
     ·衣原体 RNase HⅡ底物的制备第29-30页
     ·衣原体 RNase HⅡ活性鉴定第30-31页
     ·金属离子对衣原体RNase HⅡ活性的影响第31页
     ·衣原体RNase HⅡ酶促反应的最适pH值测定第31页
     ·衣原体 RNase HⅡ热稳定性分析第31页
     ·衣原体 RNase HⅡ酶促反应动力学第31-32页
     ·衣原体 RNase HⅡ酶切位点特征第32页
     ·衣原体 RNase HⅡ酶切底物特异性第32页
3 结果与分析第32-45页
   ·衣原体 RNase HⅡ的表达第32-34页
   ·衣原体 RNase HⅡ的纯化第34-35页
   ·酶的比活性第35-36页
   ·动力学常数第36页
   ·金属离子依赖性第36-39页
   ·酶促反应的最适pH值第39页
   ·酶的热稳定性分析第39-40页
   ·酶切位点特异性第40-43页
   ·酶切底物特异性第43-45页
4 讨论第45-48页
   ·衣原体RNase HⅡ的表达与纯化第45页
   ·衣原体RNase HⅡ的功能鉴定第45-48页
5 展望第48-49页
   ·衣原体 RNase HⅡ的晶体结构分析第48-49页
   ·建立新型 SNP 检测技术第49页
参考文献第49-57页
附录第57页

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