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猪圆环病毒Ⅱ型多表位疫苗的研究

摘要第1-6页
Abstract第6-10页
英文缩略表第10-11页
第一章 引言第11-20页
   ·猪圆环病毒的研究进展第11-16页
       ·分类地位第11页
     ·形态学及生物学特征第11页
     ·PCV1 和 PCV2第11-12页
     ·基因组成第12-13页
     ·PCV 的复制模式第13-15页
     ·仔猪断奶后多系统衰竭综合征第15页
     ·PCV2 的致病机理第15-16页
   ·猪圆环病毒的疫苗研究进展第16-17页
   ·多表位疫苗的研究进展第17-19页
     ·表位的预测第18页
     ·抗原表位的选择第18页
     ·多表位疫苗的设计原则第18-19页
   ·研究的目的和意义第19-20页
第二章 卡介苗 Hsp65 基因的克隆及 PCV2 表位及其串联体的筛选第20-31页
   ·材料第20-21页
     ·基因第20页
     ·菌株、载体第20-21页
     ·试剂第21页
   ·卡介苗 Hsp65 基因的克隆第21-25页
     ·卡介苗的培养第21页
     ·卡介苗基因组 DNA 的提取第21页
     ·引物设计第21-22页
     ·Hsp65 基因的扩增第22页
     ·Hsp65 PCR 产物的克隆第22-24页
     ·重组质粒的鉴定第24-25页
   ·PCV2 表位及其串联体的筛选第25-26页
     ·PCV2 抗原表位的筛选第25页
     ·表位串联体的筛选第25页
     ·表位串联体序列的优化第25-26页
   ·实验结果第26-30页
     ·Hsp65 基因的扩增第26页
       ·重组质粒的酶切及 PCR 鉴定第26-27页
     ·表位串联体的筛选第27-30页
   ·讨论第30-31页
第三章 重组表达质粒的构建以及在大肠杆菌中的表达第31-42页
   ·材料和方法第31-35页
     ·试剂第31页
     ·重组中间克隆载体的构建第31-32页
     ·重组表达质粒的构建第32页
     ·重组表达菌的表达及鉴定第32-33页
     ·融合蛋白的纯化第33-34页
     ·纯化蛋白的复性与加工第34-35页
     ·蛋白浓度的测定第35页
   ·结果第35-41页
     ·重组中间克隆载体的构建第35页
     ·重组表达载体的构建第35-36页
     ·重组蛋白的表达及其鉴定第36-38页
     ·重组蛋白可溶性的确定第38页
     ·重组蛋白的纯化及复性第38-41页
     ·蛋白浓度的测定第41页
   ·讨论第41-42页
第四章 重组蛋白免疫效果评价第42-53页
   ·材料和方法第42-45页
     ·实验动物第42页
     ·实验材料第42页
     ·重组蛋白免疫小鼠第42-43页
     ·ELISA 检测特异性抗体第43页
     ·病毒中和抗体的测定第43-44页
     ·T 淋巴细胞增殖实验第44页
     ·淋巴细胞 CD4、CD8 分型的测定第44页
     ·抗体分型第44-45页
     ·细胞因子 IFN-γ和 IL-4 的检测第45页
   ·结果第45-50页
     ·特异性抗体的检测结果第45-46页
     ·病毒中和抗体的测定结果第46-47页
     ·T 淋巴细胞增殖实验第47-49页
     ·淋巴细胞 CD4、CD8 分型的测定第49页
     ·抗体分型第49页
     ·细胞因子 IFN-γ和 IL-4 的检测结果第49-50页
   ·讨论第50-53页
第五章 全文结论第53-54页
参考文献第54-60页
致谢第60-61页
作者简历第61页

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