| 第一部分 文献综述 | 第1-39页 |
| 第一章 溶栓药物的研究进展 | 第14-28页 |
| ·重组t-PA 的突变体 | 第15-18页 |
| ·Reteplase (R-PA) | 第16-17页 |
| ·Tenecteplase(TNK-t-PA) | 第17页 |
| ·Lanoteplase (nPA) | 第17-18页 |
| ·Monteplase (E-6010) | 第18页 |
| ·重组scu-PA 的突变体 | 第18-20页 |
| ·提高血纤维蛋白专一性和血栓选择性 | 第19-20页 |
| ·延长在体内的半衰期 | 第20页 |
| ·t-PA和scu-PA的嵌合体 | 第20-21页 |
| ·重组吸血蝙蝠唾液纤溶酶原激活剂 | 第21页 |
| ·TSV-PA | 第21-22页 |
| ·链激酶 | 第22页 |
| ·葡萄糖球菌激酶 | 第22-23页 |
| ·纳豆激酶 | 第23页 |
| ·导向溶栓药物 | 第23-24页 |
| ·溶栓辅助药 | 第24-26页 |
| ·血小板膜受体糖蛋白Ⅱb/ Ⅲa 阻断剂 | 第24-25页 |
| ·水蛭素(hirudin) | 第25页 |
| ·双功能溶栓药物 | 第25-26页 |
| ·溶纤酶(fibrolase) | 第26页 |
| ·中草药 | 第26页 |
| ·结语 | 第26-28页 |
| 第二章 外源基因在哺乳动物细胞高效表达的研究进展 | 第28-39页 |
| ·哺乳动物高效表达载体的构建 | 第28-32页 |
| ·克服位置效应,提高外源基因的表达 | 第28-29页 |
| ·提高转录效率,促进外源基因的表达 | 第29-30页 |
| ·对翻译水平进行调控,提高目的基因的表达 | 第30-31页 |
| ·对整合位点进行优化,提高表达水平 | 第31-32页 |
| ·通过增加目的基因的拷贝数,提高目的基因的表达 | 第32页 |
| ·对宿主细胞的改造 | 第32-35页 |
| ·将某些因子导入宿主细胞,维系细胞的正常生命活动 | 第32-33页 |
| ·改造宿主细胞,降低其代谢产物量 | 第33-34页 |
| ·改造宿主细胞,使其具有抗凋亡能力 | 第34-35页 |
| ·改造CHO细胞,控制其增殖速率 | 第35页 |
| ·利用IRES将多种蛋白耦联表达 | 第35页 |
| ·外源基因的导入方法 | 第35-38页 |
| ·磷酸钙沉淀法 | 第36页 |
| ·电穿孔法 | 第36页 |
| ·阳离子脂质体转染方法 | 第36-37页 |
| ·病毒介导的基因导入方法 | 第37-38页 |
| ·小结 | 第38-39页 |
| 第二部分 试验部分 | 第39-100页 |
| 第三章 人尿激酶原突变体的构建 | 第39-50页 |
| ·材料与方法 | 第40-41页 |
| ·材料 | 第40页 |
| ·人pro-UK全长cDNA的扩增与序列测定 | 第40-41页 |
| ·人pro-UK 突变cDNA的获得与序列测定 | 第41页 |
| ·尿激酶原突变体表达载体的构建 | 第41页 |
| ·结果与分析 | 第41-47页 |
| ·人pro-UK全长cDNA的扩增与序列分析 | 第41-42页 |
| ·pro-UK基因的突变体的构建 | 第42-45页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第45页 |
| ·连入组合突变体13重组表达载体的构建 | 第45-47页 |
| ·讨论 | 第47-49页 |
| ·关于尿激酶原的简介 | 第47页 |
| ·选择突变位点的依据 | 第47-48页 |
| ·基因定点突变的方法 | 第48-49页 |
| ·小结 | 第49-50页 |
| 第四章 人尿激酶原突变体在CHO细胞中的表达及特性分析 | 第50-67页 |
| ·材料与方法 | 第50-55页 |
| ·材料 | 第50-51页 |
| ·表达载体线性化 | 第51页 |
| ·细胞培养与传代 | 第51页 |
| ·CHO细胞对Geneticin的抗性实验 | 第51页 |
| ·阳离子脂质体法转染CHO细胞 | 第51-52页 |
| ·琼脂糖-纤维蛋白溶圈法测定尿激酶原的活性 | 第52页 |
| ·抗原-抗体中和实验 | 第52页 |
| ·SDS-PAGE 纤维蛋白自显影分析 | 第52-53页 |
| ·Western blot分析 | 第53-54页 |
| ·对凝血酶的抵抗力实验 | 第54页 |
| ·对血浆PAI-1 的抗性实验 | 第54-55页 |
| ·同时对血浆PAI-1 和凝血酶的抵抗力实验 | 第55页 |
| ·建立表达尿激酶原突变体的生物工程细胞系 | 第55页 |
| ·结果与分析 | 第55-62页 |
| ·转染前表达载体线性化 | 第55-56页 |
| ·CHO细胞对Geneticin的抗性实验 | 第56-57页 |
| ·转染CHO细胞及抗性克隆的获得 | 第57页 |
| ·琼脂糖-纤维蛋白溶圈法测定各表达产物的活性 | 第57-58页 |
| ·抗原-抗体中和实验 | 第58-59页 |
| ·SDS-PAGE纤维蛋白自显影分析 | 第59页 |
| ·Westernblot分析 | 第59页 |
| ·突变体对凝血酶或/和PAI-1的抵抗力分析 | 第59-61页 |
| ·建立表达尿激酶原突变体的生物工程细胞系 | 第61-62页 |
| ·讨论 | 第62-65页 |
| ·关于表达载体的线性化 | 第62页 |
| ·关于外源基因导入方法 | 第62-63页 |
| ·pro-UK突变体的初步评价 | 第63-65页 |
| ·pro-UK突变体在CHO-dhfr~-细胞中的表达 | 第65页 |
| ·小结 | 第65-67页 |
| 第五章 指导尿激酶原突变体在动物乳腺特异性表达的重组载体的构建 | 第67-80页 |
| ·材料与方法 | 第67-69页 |
| ·材料 | 第68页 |
| ·重组PBCI的构建 | 第68-69页 |
| ·乳腺特异性表达的重组慢病毒载体的构建 | 第69页 |
| ·结果与分析 | 第69-75页 |
| ·重组PBCI的构建 | 第69-71页 |
| ·乳腺特异性表达的重组慢病毒载体的构建 | 第71-75页 |
| ·讨论 | 第75-79页 |
| ·关于乳腺特异性表达载体PBCI | 第75-76页 |
| ·关于乳腺特异性表达 | 第76-77页 |
| ·关于慢病毒介导的转基因技术 | 第77-79页 |
| ·小结 | 第79-80页 |
| 第六章 用大肠杆菌同源重组生产重组腺病毒 | 第80-90页 |
| ·材料与方法 | 第80-83页 |
| ·材料 | 第80-81页 |
| ·制备超级感受态BJ5183 | 第81页 |
| ·重组穿梭载体的构建 | 第81页 |
| ·制备电击感受态BJ5183 | 第81-82页 |
| ·重组腺病毒载体的构建 | 第82页 |
| ·重组腺病毒的生产 | 第82-83页 |
| ·结果与分析 | 第83-86页 |
| ·重组穿梭载体的构建 | 第83页 |
| ·重组腺病毒载体的构建 | 第83-84页 |
| ·重组腺病毒的生产 | 第84-86页 |
| ·讨论 | 第86-89页 |
| ·腺病毒的生活周期 | 第86-87页 |
| ·腺病毒载体的优点 | 第87-88页 |
| ·生产腺病毒的几个环节 | 第88-89页 |
| ·小结 | 第89-90页 |
| 第七章 结论 | 第90-100页 |
| 参考文献 | 第100-101页 |
| 致谢 | 第101-102页 |
| 个人简介 | 第102页 |
