| 中文摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-17页 |
| ·茶氨酸(Theanine)简介 | 第9-10页 |
| ·茶氨酸在茶树体内存在的生理意义 | 第9页 |
| ·Theanine 的药理作用 | 第9页 |
| ·茶氨酸的主要用途 | 第9-10页 |
| ·茶氨酸的化学结构及理化性质 | 第10页 |
| ·茶氨酸的合成 | 第10-14页 |
| ·茶树中茶氨酸的生物合成途径 | 第10-11页 |
| ·茶氨酸的人工合成 | 第11-14页 |
| ·化学合成法 | 第11页 |
| ·生物转化合成法 | 第11-14页 |
| ·茶树愈伤组织培养 | 第11页 |
| ·酶转化法合成 | 第11-12页 |
| ·微生物转化法 | 第12页 |
| ·三种生物转化法的优缺点比较 | 第12-13页 |
| ·生物转化法所用酶的优缺点比较 | 第13-14页 |
| ·γ-谷氨酰基转肽酶简介 | 第14-16页 |
| ·概述 | 第14页 |
| ·大肠杆菌K-12中的γ-谷氨酰基转肽酶 | 第14-16页 |
| ·概述 | 第14页 |
| ·GGT前体翻译后的加工及GGT催化反应机制 | 第14-15页 |
| ·大肠杆菌K-12中的γ-谷氨酰基转肽酶的应用 | 第15-16页 |
| ·课题的提出和主要研究内容 | 第16-17页 |
| ·立题依据 | 第16页 |
| ·方案制定 | 第16页 |
| ·主要研究内容 | 第16-17页 |
| 第二章 材料与方法 | 第17-26页 |
| ·材料 | 第17-20页 |
| ·菌株和质粒 | 第17页 |
| ·培养基和工具酶 | 第17页 |
| ·培养基 | 第17页 |
| ·工具酶 | 第17页 |
| ·试剂 | 第17-19页 |
| ·实验仪器 | 第19-20页 |
| ·方法 | 第20-26页 |
| ·Escherichia coLi总DNA的方法快速提取方法 | 第20页 |
| ·碱裂解法提取质粒 | 第20-21页 |
| ·E.coli中高拷贝质粒的快速提取 | 第21页 |
| ·质粒DNA纯化方法 | 第21页 |
| ·引物合成与PCR扩增 | 第21-22页 |
| ·引物合成 | 第21-22页 |
| ·PCR扩增 | 第22页 |
| ·以P1、P2为引物的PCR反应条件 | 第22页 |
| ·以P1、P3为引物的PCR反应条件 | 第22页 |
| ·PCR产物纯化回收 | 第22页 |
| ·PCR产物割胶回收 | 第22页 |
| ·大肠杆菌JM109的转化 | 第22-23页 |
| ·大肠杆菌JM109感受态的制备 | 第22-23页 |
| ·感受态大肠杆菌JM109的转化 | 第23页 |
| ·在无选择压力下的质粒稳定性检验 | 第23页 |
| ·GGT酶粗提液的制备及酶活测定 | 第23-24页 |
| ·周质中GGT酶蛋白分离方法-渗透压法 | 第23页 |
| ·酶活测定方法 | 第23-24页 |
| ·蛋白质含量测定方法 - 考马斯蓝染色法 | 第24页 |
| ·利用E. coli JM109产GGT时的培养条件 | 第24页 |
| ·SDS-PAGE蛋白电泳方法 | 第24-25页 |
| ·全细胞生物转化生成茶氨酸的反应条件 | 第25页 |
| ·茶氨酸产量测定 | 第25页 |
| ·细胞密度测定 | 第25-26页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第26-46页 |
| ·含重组质粒pUC18-ggt(s+p+)的工程菌的构建 | 第26-29页 |
| ·ggt(s+p+)基因的PCR扩增 | 第26页 |
| ·重组质粒pUC18-ggt(s+p+)的构建及酶切鉴定 | 第26-28页 |
| ·重组菌pUC18-ggt(s+p+)的质粒稳定性 | 第28页 |
| ·重组质粒pUC18-ggt(s+p+)在大肠杆菌JM109中的表达 | 第28-29页 |
| ·重组菌E.coli JM109(pUC18-ggt(s+p+))全细胞转化法生成茶氨酸 | 第29页 |
| ·讨论 | 第29页 |
| ·含重组质粒pEtac-ggt(s+p+)的工程菌的构建 | 第29-34页 |
| ·ggt(s+p+)基因的PCR扩增 | 第30页 |
| ·重组质粒pEtac-ggt(s+p+)的构建及酶切鉴定 | 第30页 |
| ·重组菌中pEtac-ggt(s+p+)的质粒稳定性 | 第30-33页 |
| ·重组质粒pEtac-ggt(s+p+)在大肠杆菌JM109中的表达 | 第33页 |
| ·重组菌E.coli JM109(pEtac-ggt(s+p+))全细胞转化法生成茶氨酸 | 第33-34页 |
| ·讨论 | 第34页 |
| ·含重组质粒pET20b-ggt(s-p-)的工程菌的构建 | 第34-39页 |
| ·ggt(s-p-)基因的PCR扩增 | 第35页 |
| ·重组质粒pET20b-ggt(s-p-)的构建及酶切鉴定 | 第35-36页 |
| ·重组质粒pET20b-ggt(s-p-)转入表达宿主菌E.coli BL21(DE | 第36页 |
| ·重组菌中pET20b-ggt(s-p-)的质粒稳定性 | 第36页 |
| ·重组质粒pET20b-ggt(s-p-)在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达 | 第36-38页 |
| ·重组菌BL21(DE3)(pET20b-ggt(s-p-))全细胞转化法生成茶氨酸 | 第38页 |
| ·讨论 | 第38-39页 |
| ·重组子全细胞蛋白电泳分析 | 第39-41页 |
| ·重组大肠杆菌E.coli JM109(pEtac-ggt(s+p+))产酶诱导条件的初步探索 | 第41-43页 |
| ·最适诱导浓度的确定 | 第41-42页 |
| ·最适诱导时间长度的确定 | 第42-43页 |
| ·重组大肠杆菌E.coli JM109(pEtac-ggt(s+p+))生产茶氨酸的转化条件的初步探索 | 第43-45页 |
| ·转化体系的pH值对转化效率的影响 | 第43-44页 |
| ·温度对转化效率的影响 | 第44-45页 |
| ·展望 | 第45-46页 |
| 论文结论 | 第46-47页 |
| 致 谢 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-51页 |
| 硕士研究期间在科学技术期刊上发表的论文 | 第51-52页 |
| 附 录 | 第52-53页 |
