| 中文摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-14页 |
| 引言 | 第14-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-40页 |
| 1．1 抗生素耐药性问题 | 第16-17页 |
| 1．2 免疫毒素 | 第17-23页 |
| 1．3 EGFR与肿瘤 | 第23-24页 |
| 1．4 正电性抗菌肽 | 第24-33页 |
| 1．5 表皮生长因子 | 第33-36页 |
| 1．6 pET表达系统 | 第36-40页 |
| 第二章 中蜂（Apis cerana）蜂毒溶血肽（Melittin）成熟区cDNA的克隆及其在大肠杆菌中的重组表达 | 第40-61页 |
| 2．1 材料与方法 | 第40-54页 |
| 2．1．1 质粒、菌株、试剂盒、酶、培养基及动物材料 | 第40页 |
| 2．1．2 提取中蜂（Apis cerana）毒腺细胞总RNA | 第40-41页 |
| 2．1．3 RNA浓度及纯度测定 | 第41页 |
| 2．1．4 引物合成 | 第41-42页 |
| 2．1．5 RT-PCR | 第42-43页 |
| 2．1．6 琼脂糖凝胶电泳 | 第43-44页 |
| 2．1．7 pUCT载体的构建 | 第44-45页 |
| 2．1．8 PCR产物的克隆 | 第45-46页 |
| 2．1．9 重组子（pUCTMel）的鉴定 | 第46-48页 |
| 2．1．10 重组表达载体（pETMel）的构建 | 第48页 |
| 2．1．11 重组子pETMel的鉴定 | 第48-49页 |
| 2．1．12 pETMel序列的测定 | 第49页 |
| 2．1．13 中蜂（Apis cerana）Melittin成熟区的重组表达 | 第49-51页 |
| 2．1．14 表达产物的电泳检测 | 第51-53页 |
| 2．1．15 纯化的目的蛋白的浓度测定 | 第53-54页 |
| 2．1．16 表达产物的生物活性检测 | 第54页 |
| 2．2 结果与分析 | 第54-60页 |
| 2．2．1 中蜂（Apis cerana）毒腺总RNA样品的浓度和纯度 | 第54页 |
| 2．2．2 中蜂（Apis cerana）Melittin成熟区序列的PCR产物琼脂糖凝胶电泳结果 | 第54-55页 |
| 2．2．3 中蜂（Apis cerana）Melittin成熟区序列cDNA的克隆及其重组克隆载体pUCTMel的鉴定 | 第55-56页 |
| 2．2．4 重组表达载体pETMel的鉴定 | 第56-57页 |
| 2．2．5 中蜂（Apis cerana）Melittin成熟区序列cDNA的测定 | 第57页 |
| 2．2．6 中蜂（Apis cerana）Melittin重组表达产物的电泳检测 | 第57-58页 |
| 2．2．7 目的产物的浓度 | 第58页 |
| 2．2．8 中蜂（Apis cerana）Melittin重组表达产物的生物活性检测 | 第58-60页 |
| 2．3 讨论 | 第60-61页 |
| 第三章 小鼠表皮生长因子cDNA的克隆及在体内各器官中表达丰度的研究 | 第61-71页 |
| 3．1 材料与方法 | 第61-65页 |
| 3．1．1 质粒、菌株、试剂盒、酶、培养基及动物材料 | 第61页 |
| 3．1．2 取样及样品处理 | 第61-62页 |
| 3．1．3 组织器官总RNA的提取 | 第62页 |
| 3．1．4 RNA浓度及纯度测定 | 第62页 |
| 3．1．5 引物合成 | 第62页 |
| 3．1．6 RT-PCR | 第62页 |
| 3．1．7 琼脂糖凝胶电泳 | 第62页 |
| 3．1．8 PCR产物的克隆 | 第62-63页 |
| 3．1．9 重组子（pGEMTmEGF）的鉴定 | 第63页 |
| 3．1．10 pGEMTmEGF序列的测定 | 第63页 |
| 3．1．11 采用定量竞争RT-PCR法，测定小鼠颌下腺、腮腺、肾脏、肺、肝脏、心脏和骨骼肌中mEGF mRNA的表达丰度 | 第63-65页 |
| 3．2 结果与分析 | 第65-70页 |
| 3．2．1 小鼠颌下腺、腮腺、肾脏、肺、肝脏、心脏和骨骼肌的RNA样品的浓度及纯度测定 | 第65-66页 |
| 3．2．2 mEGF成熟区序列的PCR产物琼脂糖凝胶电泳结果 | 第66页 |
| 3．2．3 mEGF成熟区序列cDNA的克隆及其重组克隆载体pGEMTmEGF的鉴定 | 第66-67页 |
| 3．2．4 mEGF成熟区序列cDNA的测定 | 第67页 |
| 3．2．5 竞争标准cRNA的浓度及纯度 | 第67-68页 |
| 3．2．6 用RT-PCR法检测到的小鼠各器官中mEGF表达情况 | 第68页 |
| 3．2．7 各器官中mEGF mRNA定量竞争RT-PCR预实验 | 第68-69页 |
| 3．2．8 各器官mEGF mRNA定量竞争RT-PCR结果 | 第69-70页 |
| 3．3 讨论 | 第70-71页 |
| 第四章 小鼠表皮生长因子成熟区cDNA的克隆及其在大肠杆菌中的重组表达 | 第71-77页 |
| 4．1 材料与方法 | 第71-73页 |
| 4．1．1 琼脂糖凝胶电泳 | 第71页 |
| 4．1．2 mEGF成熟区的PCR产物的克隆与鉴定 | 第71页 |
| 4．1．3 重组表达载体（pETmEGF）的构建 | 第71-72页 |
| 4．1．4 重组子pETmEGF的鉴定 | 第72页 |
| 4．1．5 pETmEGF序列的测定 | 第72页 |
| 4．1．6 mEGF的融合表达与初步纯化 | 第72页 |
| 4．1．7 表达产物的电泳检测 | 第72-73页 |
| 4．1．8 纯化的目的产物的浓度测定 | 第73页 |
| 4．1．9 表达产物的生物活性检测 | 第73页 |
| 4．2 结果与分析 | 第73-76页 |
| 4．2．1 重组子pETmEGF的鉴定 | 第73-74页 |
| 4．2．2 pETmEGF序列的测定 | 第74页 |
| 4．2．3 mEGF重组表达产物的电泳检测 | 第74-75页 |
| 4．2．4 经初步纯化的目的产物的浓度 | 第75页 |
| 4．2．5 mEGF重组表达产物的生物活性检测 | 第75-76页 |
| 4．3 讨论 | 第76-77页 |
| 第五章 mEGF-Melittin嵌合DNA在大肠杆菌中表达的研究 | 第77-88页 |
| 5．1 材料与方法 | 第77-82页 |
| 5．1．1 质粒、菌株、酶、培养基 | 第77页 |
| 5．1．2 琼脂糖凝胶电泳 | 第77页 |
| 5．1．3 连接子（linker）的合成 | 第77-78页 |
| 5．1．4 mEGF-Mel嵌合DNA的构建 | 第78-79页 |
| 5．1．5 mEGF-Mel嵌合DNA的克隆 | 第79页 |
| 5．1．6 重组子（pUCmEGFMel）的鉴定 | 第79-80页 |
| 5．1．7 重组表达载体的构建 | 第80-81页 |
| 5．1．8 重组子pETmEGFMel的鉴定 | 第81页 |
| 5．1．9 pETmEGFMel序列的测定 | 第81页 |
| 5．1．10 mEGF-Melittin嵌合蛋白的重组表达与初步纯化 | 第81页 |
| 5．1．11 表达产物的电泳检测 | 第81页 |
| 5．1．12 纯化的目的产物的浓度测定 | 第81-82页 |
| 5．1．13 表达产物的生物活性检测 | 第82页 |
| 5．2 结果与分析 | 第82-87页 |
| 5．2．1 mEGF-Mel嵌合DNA的PCR产物的琼脂糖凝胶电泳结果 | 第82-83页 |
| 5．2．2 重组克隆载体pUCmEGFMel的鉴定 | 第83-84页 |
| 5．2．3 重组表达载体pETmEGFMel的鉴定 | 第84-85页 |
| 5．2．4 mEGF-Mel嵌合DNA序列的测定 | 第85页 |
| 5．2．5 重组表达产物mEGF-Melittin嵌合蛋白的电泳检测 | 第85页 |
| 5．2．6 纯化的mEGF-Melittin嵌合蛋白的浓度 | 第85-86页 |
| 5．2．7 mEGF-Melittin嵌合蛋白的生物活性 | 第86-87页 |
| 5．3 讨论 | 第87-88页 |
| 第六章 重组表达菌株BL21-pETM、BL21-pETmEGF、BL21-pETmEGFMel的遗传稳定性研究 | 第88-93页 |
| 6．1 材料与方法 | 第88-89页 |
| 6．1．1 菌株与培养基 | 第88页 |
| 6．1．2 菌种传代方法 | 第88页 |
| 6．1．3 质粒检查 | 第88页 |
| 6．1．4 表达产物生物活性检测 | 第88-89页 |
| 6．2 结果与分析 | 第89-92页 |
| 6．2．1 各代细胞所含重组质粒中插入序列的测定 | 第89页 |
| 6．2．2 各代细胞表达的目的产物的生物活性 | 第89-92页 |
| 6．3 讨论 | 第92-93页 |
| 第七章 三种重组表达菌株（BL21-pETM、BL21-pETmEGF、BL21-pETmEGFMel）的摇瓶发酵工艺研究 | 第93-105页 |
| 7．1 材料与方法 | 第93-96页 |
| 7．1．1 菌株与培养基 | 第93页 |
| 7．1．2 葡萄糖和甘油含量测定 | 第93-95页 |
| 7．1．3 菌种活化 | 第95页 |
| 7．1．4 装液量、接种量和初始pH值的选择 | 第95页 |
| 7．1．5 目的产物诱导表达条件的选择（操纵子示意图） | 第95-96页 |
| 7．1．6 菌株生物量测定 | 第96页 |
| 7．1．7 重组蛋白表达量测定 | 第96页 |
| 7．2 结果分析 | 第96-104页 |
| 7．2．1 最佳装液量、接种量和初始pH值的确定 | 第96-98页 |
| 7．2．2 最佳诱导条件的确定 | 第98-100页 |
| 7．2．3 底物消耗、细胞生长和产物合成 | 第100-104页 |
| 7．3 讨论 | 第104-105页 |
| 第八章 结论及后续研究展望 | 第105-108页 |
| 参考文献 | 第108-122页 |
| 致谢 | 第122-123页 |
| 附： 个人简历及攻读博士学位期间撰写的论文 | 第123-124页 |
