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强化表达SAM合成酶促进SAM在Pichia pastoris中累积

文献综述第1-16页
第一章 来源于酿酒酵母(Saccharomyses cerevisiae)的S-腺苷-L-甲硫氨酸合成酶(SAMS)基因在甲醇酵母(Pichia pastoris)中的克隆和表达第16-27页
 1 材料和方法(Materials and Methods)第17-20页
  1.1 材料第17页
   1.1.1 菌株和试剂第17页
   1.1.2 培养基第17页
  1.2 方法第17-20页
   1.2.1 常规分子生物学操作第17-18页
   1.2.2 S.cerevisiae来源的SAMS2基因的克隆第18页
   1.2.3 胞内表达质粒的构建第18页
   1.2.4 表达质粒的重组转化和高表达重组子的筛选第18-19页
   1.2.5 小量快速抽提细胞内SAM第19页
   1.2.6 SAM的HPLC法定量第19页
   1.2.7 酵母细胞蛋白粗抽提物的制备第19页
   1.2.8 SAM合成酶活力的测定第19-20页
   1.2.9 细胞培养第20页
 2 结果(Results)第20-23页
  2.1 基因克隆和重组菌株构建第20-21页
   2.1.1 来源于S.cerevisiae的SAMS2基因的获得第20页
   2.1.2 胞内表达重组质粒的构建第20-21页
   2.1.3 重组菌株获得第21页
  2.2 外源SAMS2基因表达提高了重组菌SAMS活力第21-22页
  2.3 重组菌表达累积SAM第22-23页
 3 讨论(Discussion)第23-24页
 参考文献第24-27页
第二章 SAM高产菌发酵条件优化及SAM稳定性初步研究第27-38页
 1 材料和方法第28-29页
  1.1 材料第28页
   1.1.1 菌株和试剂第28页
   1.1.2 培养基第28页
  1.2 方法第28-29页
   1.2.1 培养条件优化第29页
   1.2.2 小量快速抽提细胞内SAM第29页
   1.2.3 SAM的HPLC法定量第29页
   1.2.4 温度对SAM稳定性影响第29页
   1.2.5 pH对SAM稳定性影响第29页
 2 结果(Results)第29-35页
  2.1 培养条件的优化第29-33页
   2.1.1 碳源对SAM累积的影响第29-31页
   2.1.2 氮源对SAM累积的影响第31-32页
   2.1.3 溶解氧对SAM累积的影响第32页
   2.1.4 初始pH对SAM累积的影响第32-33页
   2.1.5 L-met对SAM累积的影响第33页
   2.1.6 生物素对SAM累积的影响第33页
  2.2 SAM稳定性研究第33-35页
   2.2.1 温度对SAM稳定性的影响第33-34页
   2.2.2 pH对SAM稳定性的影响第34-35页
 3 讨论(Discussion)第35-36页
 参考文献(Reference)第36-38页
发表论文和专利第38-39页
致谢第39页

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