文献综述 | 第1-16页 |
第一章 来源于酿酒酵母(Saccharomyses cerevisiae)的S-腺苷-L-甲硫氨酸合成酶(SAMS)基因在甲醇酵母(Pichia pastoris)中的克隆和表达 | 第16-27页 |
1 材料和方法(Materials and Methods) | 第17-20页 |
1.1 材料 | 第17页 |
1.1.1 菌株和试剂 | 第17页 |
1.1.2 培养基 | 第17页 |
1.2 方法 | 第17-20页 |
1.2.1 常规分子生物学操作 | 第17-18页 |
1.2.2 S.cerevisiae来源的SAMS2基因的克隆 | 第18页 |
1.2.3 胞内表达质粒的构建 | 第18页 |
1.2.4 表达质粒的重组转化和高表达重组子的筛选 | 第18-19页 |
1.2.5 小量快速抽提细胞内SAM | 第19页 |
1.2.6 SAM的HPLC法定量 | 第19页 |
1.2.7 酵母细胞蛋白粗抽提物的制备 | 第19页 |
1.2.8 SAM合成酶活力的测定 | 第19-20页 |
1.2.9 细胞培养 | 第20页 |
2 结果(Results) | 第20-23页 |
2.1 基因克隆和重组菌株构建 | 第20-21页 |
2.1.1 来源于S.cerevisiae的SAMS2基因的获得 | 第20页 |
2.1.2 胞内表达重组质粒的构建 | 第20-21页 |
2.1.3 重组菌株获得 | 第21页 |
2.2 外源SAMS2基因表达提高了重组菌SAMS活力 | 第21-22页 |
2.3 重组菌表达累积SAM | 第22-23页 |
3 讨论(Discussion) | 第23-24页 |
参考文献 | 第24-27页 |
第二章 SAM高产菌发酵条件优化及SAM稳定性初步研究 | 第27-38页 |
1 材料和方法 | 第28-29页 |
1.1 材料 | 第28页 |
1.1.1 菌株和试剂 | 第28页 |
1.1.2 培养基 | 第28页 |
1.2 方法 | 第28-29页 |
1.2.1 培养条件优化 | 第29页 |
1.2.2 小量快速抽提细胞内SAM | 第29页 |
1.2.3 SAM的HPLC法定量 | 第29页 |
1.2.4 温度对SAM稳定性影响 | 第29页 |
1.2.5 pH对SAM稳定性影响 | 第29页 |
2 结果(Results) | 第29-35页 |
2.1 培养条件的优化 | 第29-33页 |
2.1.1 碳源对SAM累积的影响 | 第29-31页 |
2.1.2 氮源对SAM累积的影响 | 第31-32页 |
2.1.3 溶解氧对SAM累积的影响 | 第32页 |
2.1.4 初始pH对SAM累积的影响 | 第32-33页 |
2.1.5 L-met对SAM累积的影响 | 第33页 |
2.1.6 生物素对SAM累积的影响 | 第33页 |
2.2 SAM稳定性研究 | 第33-35页 |
2.2.1 温度对SAM稳定性的影响 | 第33-34页 |
2.2.2 pH对SAM稳定性的影响 | 第34-35页 |
3 讨论(Discussion) | 第35-36页 |
参考文献(Reference) | 第36-38页 |
发表论文和专利 | 第38-39页 |
致谢 | 第39页 |