| 致谢 | 第1-11页 |
| 中文摘要 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-21页 |
| ·甾醇的结构及药用功能 | 第12-13页 |
| ·植物甾醇的分类 | 第13页 |
| ·植物甾醇与抗氧化性 | 第13-14页 |
| ·植物甾醇与心血管系统 | 第14-16页 |
| ·植物甾醇与植物衰老 | 第16页 |
| ·植物甾醇的提取方法 | 第16-18页 |
| ·混合植物甾醇提取方法 | 第17页 |
| ·植物甾醇精制及单体分离方法 | 第17-18页 |
| ·溶剂结晶法 | 第18页 |
| ·分子蒸馏技术 | 第18页 |
| ·植物甾醇与基因工程 | 第18-19页 |
| ·植物甾醇合成关键酶基因的调控 | 第19-21页 |
| 第二章 大麦C-8,7甾醇异构酶基因克隆及其表达分析 | 第21-29页 |
| 1 材料与方法 | 第21-25页 |
| ·实验材料 | 第21页 |
| ·植物材料 | 第21页 |
| ·主要试剂和材料 | 第21页 |
| ·大麦种子发芽 | 第21页 |
| ·大麦幼苗总RNA的提取及cDNA第一条链的合成 | 第21-22页 |
| ·大麦种子RNA的提取 | 第21-22页 |
| ·RNA的纯度检测 | 第22页 |
| ·cDNA第一条链的合成 | 第22页 |
| ·大麦C-8,7甾醇异构酶基因的cDNA克隆 | 第22-24页 |
| ·基因片断PCR扩增 | 第22页 |
| ·PCR扩增产物的检测与回收纯化 | 第22-23页 |
| ·回收产物与pBS-T载体的连接 | 第23页 |
| ·重组载体对大肠杆菌的转化 | 第23-24页 |
| ·感受态细胞的制备(Ca-Mn法): | 第23页 |
| ·DNA的热击转化 | 第23-24页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第24页 |
| ·碱裂解法小量提取质粒 | 第24页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第24页 |
| ·序列的测定 | 第24页 |
| ·定量RT-PCR分析 | 第24-25页 |
| 2 结果分析 | 第25-28页 |
| ·大麦C-8,7甾醇异构酶基因克隆及序列分析 | 第25-27页 |
| ·大麦幼芽总RNA的提取 | 第25页 |
| ·大麦C-8,7甾醇异构酶基因的cDNA克隆及序列分析 | 第25-27页 |
| ·C-8,7甾醇异构酶基因的表达特性分析 | 第27-28页 |
| ·大麦HvSI1的时空表达特性 | 第27-28页 |
| ·大麦HvSI在衰老组织中的表达特性 | 第28页 |
| 3 讨论 | 第28-29页 |
| 第三章 大麦C-8,7甾醇异构酶基因体外表达及活性分析 | 第29-36页 |
| 1 材料与方法 | 第29-32页 |
| ·菌株、载体及试剂 | 第29页 |
| ·原核生物培养基的配制 | 第29页 |
| ·HvSI基因体外表达载体构建 | 第29-30页 |
| ·PCR扩增和产物的回收 | 第29页 |
| ·PCR产物和原核表达载体PGEX-4T的酶切 | 第29-30页 |
| ·PGEX-4T表达载体的连接 | 第30页 |
| ·感受态细胞的制备与转化 | 第30页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第30页 |
| ·表达载体PGEX-4T-HvSI1及PGEX-4T-HvSI2转化表达菌株BL21 | 第30页 |
| ·SDS-PAGE电泳细胞总蛋白检测分析 | 第30-32页 |
| ·SDS-PAGE电泳所需试剂的配制 | 第30-31页 |
| ·细胞总蛋白质的电泳检测和分析 | 第31-32页 |
| 2 结果分析 | 第32-34页 |
| ·原核表达载体的构建及验证 | 第32-33页 |
| ·原核表达产物的SDS-PAGE电泳结果分析 | 第33-34页 |
| 3 讨论 | 第34-36页 |
| 第四章 大麦C-8,7甾醇异构酶基因的功能研究 | 第36-48页 |
| 1 材料与方法 | 第36-39页 |
| ·受体材料 | 第36页 |
| ·载体、菌株和试剂 | 第36页 |
| ·水稻培养基的配制 | 第36-37页 |
| ·HvSI基因植物转化载体的构建 | 第37页 |
| ·根癌农杆菌介导法遗传转化水稻 | 第37-38页 |
| ·根癌农杆菌感受态细胞的制备转化 | 第37页 |
| ·种子的消毒和愈伤组织的诱导 | 第37页 |
| ·农杆菌介导水稻转化 | 第37-38页 |
| ·转基因植株的初步鉴定 | 第38页 |
| ·转基因水稻总DNA的提取 | 第38页 |
| ·转基因植株的PCR鉴定 | 第38页 |
| ·转基因水稻外源目的基因转录水平表达检测 | 第38-39页 |
| 2 结果分析 | 第39-45页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第39-42页 |
| ·真核表达载体pUbi::HvSI1的构建 | 第39页 |
| ·真核表达载体pUbi::HvSI-RNAi的构建 | 第39-40页 |
| ·真核表达载体pubi::HvSI-GFP的构建 | 第40-41页 |
| ·真核表达载体pGluB7::HvSI的构建 | 第41-42页 |
| ·C-8,7甾醇异构酶基因对水稻遗传转化的研究 | 第42-45页 |
| ·水稻胚性愈伤的获得 | 第42-43页 |
| ·抗性愈伤组织筛选及植株再生 | 第43页 |
| ·转基因植株的PCR鉴定 | 第43-44页 |
| ·过量表达转基因水稻不同部位表达特性分析 | 第44-45页 |
| 3 讨论 | 第45-48页 |
| 第五章 全文小结 | 第48-50页 |
| ·大麦C-8,7甾醇异构酶基因的克隆及其结构特点、表达特性 | 第48页 |
| ·C-8,7甾醇异构酶体外表达载体的构建和重组蛋白的获得 | 第48页 |
| ·四种植物转化载体的构建 | 第48页 |
| ·外源目的基因多种表达形式的转基因水稻植株的获得 | 第48-49页 |
| ·展望 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-53页 |
| 英文摘要 | 第53-54页 |
