| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-10页 |
| 1 引言 | 第10-19页 |
| ·禽流感病毒生物学特性 | 第10-15页 |
| ·禽流感病毒的组成和复制 | 第10-11页 |
| ·HA 和NA 基因功能 | 第11-13页 |
| ·HA 的裂解与流感病毒致病性的关系 | 第11-12页 |
| ·受体结合与释放的特异性 | 第12页 |
| ·HA 糖基化和唾液酸化对受体亲和性的调控作用 | 第12-13页 |
| ·内部基因功能 | 第13-15页 |
| ·聚合酶蛋白（PLOYMERASE） | 第13页 |
| ·核蛋白（NUCLEOPROTEIN, NP） | 第13-14页 |
| ·基质蛋白（MATEIX PROTEIN, M） | 第14-15页 |
| ·非结构蛋白（NONSTRUCTURAL PROTEIN, NS） | 第15页 |
| ·流感的历史及其流行现状 | 第15-16页 |
| ·流感的历史 | 第15-16页 |
| ·高致病性禽流感流行状况 | 第16页 |
| ·反向遗传操作技术及其在流感病毒研究中的应用 | 第16-19页 |
| ·反向遗传学和反向遗传操作技术 | 第16-17页 |
| ·流感病毒反向遗传操作系统的发展过程 | 第17-19页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第19页 |
| 2 H5N1 亚型禽流感病毒 DKFJ/01/02 分子遗传演化分析 | 第19-33页 |
| ·材料与方法 | 第19-21页 |
| ·实验用毒株及实验 SPF 鸡胚 | 第19页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第19-20页 |
| ·病毒基因组 RNA 提取与反转录 | 第20页 |
| ·PCR 与目的片段的回收 | 第20页 |
| ·目的片段的克隆 | 第20页 |
| ·序列测定 | 第20-21页 |
| ·序列拼接与分析 | 第21页 |
| ·结果 | 第21-31页 |
| ·序列测定结果 | 第21页 |
| ·HA 基因序列分析结果 | 第21-26页 |
| ·NA 基因序列分析结果 | 第26-30页 |
| ·DKFJ/01/02 内部基因组分析结果 | 第30-31页 |
| ·讨论 | 第31-33页 |
| 3 H5N1 亚型禽流感病毒 DKFJ/01/02 株生物学特性研究 | 第33-38页 |
| ·材料与方法 | 第33-35页 |
| ·病毒 | 第33页 |
| ·实验动物 | 第33页 |
| ·主要试剂 | 第33页 |
| ·鸡胚半数感染量（EID_(50)）测定 | 第33页 |
| ·细胞半数感染量（TCID_(50)）的测定 | 第33-34页 |
| ·病毒对小鼠的致病性试验 | 第34页 |
| ·病毒对小鼠的 LD_(50)测定 | 第34页 |
| ·病毒组织嗜性的确定 | 第34页 |
| ·DKFJ/01/02 流感病毒对金刚烷胺类药物 1-ADAMANTYLAMINE 的敏感性试验 | 第34-35页 |
| ·结果与分析 | 第35-37页 |
| ·病毒 EID_(50)的测定结果 | 第35页 |
| ·组织半数感染量（TCID_(50)）测定结果 | 第35页 |
| ·病毒对小鼠的致病性结果 | 第35页 |
| ·病毒组织的嗜性结果 | 第35-36页 |
| ·病毒对小鼠的 LD_(50)测定结果 | 第36页 |
| ·病毒对1-ADAMANTYLAMINE 抗药性分析结果 | 第36-37页 |
| ·讨论 | 第37-38页 |
| ·病毒对小鼠的致病性 | 第37页 |
| ·DKFJ/01/02 禽流感病毒对金刚烷胺类药物 1-ADAMANTYLAMINE 的抗药性 | 第37-38页 |
| 4 H5N1 亚型禽流感病毒 DKFJ/01/02 株反向遗传操作系统的建立 | 第38-47页 |
| ·材料与方法 | 第38-42页 |
| ·病毒株 | 第38页 |
| ·SPF 鸡胚及实验动物 | 第38-39页 |
| ·PBD 载体 | 第39页 |
| ·主要试剂 | 第39页 |
| ·引物合成 | 第39-40页 |
| ·病毒 RNA 提取、反转录和 PCR 扩增 | 第40页 |
| ·序列测定 | 第40页 |
| ·转染质粒的构建 | 第40-41页 |
| ·病毒拯救 | 第41-42页 |
| ·救获病毒鉴定 | 第42页 |
| ·拯救毒与亲本毒对小鼠的致病性试验及组织嗜性试验 | 第42页 |
| ·拯救毒与亲本毒对金刚烷胺类药物1-ADAMANTYLAMINE 的敏感性试验 | 第42页 |
| ·拯救毒与亲本毒复制动力学比较 | 第42页 |
| ·结果 | 第42-45页 |
| ·DKFJ/01/02 RT-PCR 扩增产物鉴定结果 | 第42-43页 |
| ·重组质粒的构建与鉴定结果 | 第43页 |
| ·DKFJ/01/02 重组病毒的救获和病毒鉴定结果 | 第43页 |
| ·救获毒与亲本毒感染小鼠后体重变化结果 | 第43-44页 |
| ·救获毒与亲本毒感染小鼠的组织嗜性试验结果 | 第44页 |
| ·救获毒与亲本毒对金刚烷胺药物1-ADAMANTYLAMINE 的敏感性结果 | 第44-45页 |
| ·救获毒与亲本毒复制动力学比较 | 第45页 |
| ·讨论 | 第45-47页 |
| ·影响病毒拯救效率的因素 | 第45-46页 |
| ·成功建立病毒 DKFJ/01/02 反向遗传操作系统的判定 | 第46-47页 |
| ·应用反向遗传技术确定改变致病性的关键位点 | 第47页 |
| 5 结论 | 第47-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-54页 |
| 附录 | 第54-68页 |
| 附录 1 18 株 H5N1 亚型禽流感病毒 HA 基因组序列 | 第54-61页 |
| 附录 2 18 株 H5N1 亚型禽流感病毒 NA 基因组序列 | 第61-68页 |
| 作者简历 | 第68页 |
