摘要 | 第1-4页 |
Abstract | 第4-10页 |
第一章 绪言 | 第10-28页 |
·病毒学研究 | 第10-17页 |
·病毒的形态特征 | 第10-11页 |
·理化特征 | 第11页 |
·生物特性 | 第11-12页 |
·分子生物学研究 | 第12-16页 |
·PPRV 的复制 | 第16-17页 |
·临床学研究 | 第17-19页 |
·流行病学特点 | 第17-18页 |
·临床症状 | 第18页 |
·病理学变化 | 第18-19页 |
·诊断方法研究进展 | 第19-23页 |
·初步诊断 | 第19页 |
·实验室诊断 | 第19-23页 |
·PPR 的控制与预防 | 第23-27页 |
·RP 弱毒疫苗 | 第24页 |
·PPRV 弱毒疫苗 | 第24-25页 |
·PPR 灭活疫苗 | 第25页 |
·重组亚单位疫苗 | 第25-26页 |
·嵌合体疫苗 | 第26页 |
·活载体疫苗 | 第26-27页 |
·RNA 干涉技术 | 第27页 |
·展望 | 第27-28页 |
第二章 小反刍兽疫病毒Nigeria 75/1 株F 基因的克隆 | 第28-47页 |
·实验材料 | 第28-32页 |
·病毒与细胞 | 第28页 |
·菌株与载体 | 第28页 |
·酶和主要试剂 | 第28页 |
·实验所用溶液及其配制 | 第28-31页 |
·仪器与设备 | 第31-32页 |
·实验方法 | 第32-40页 |
·Vero 细胞的培养 | 第32-33页 |
·小反刍兽疫病毒在Vero 细胞中的增殖 | 第33页 |
·引物的设计与合成 | 第33-34页 |
·病毒RNA 的提取 | 第34页 |
·反转录 | 第34-35页 |
·目的片段的扩增和回收 | 第35-36页 |
·目的基因与克隆载体的连接转化 | 第36-38页 |
·重组质粒的提取与鉴定 | 第38-40页 |
·结果 | 第40-44页 |
·病毒的体外培养结果 | 第40-41页 |
·F 基因扩增 | 第41页 |
·重组质粒的PCR 鉴定 | 第41页 |
·F 基因序列测定及编码蛋白结构预测 | 第41-44页 |
·讨论 | 第44-47页 |
·Vero 细胞的培养 | 第44-45页 |
·病毒RNA 的提取 | 第45-47页 |
第三章 小反刍兽疫病毒F 基因的原核表达及多克隆抗体的制备 | 第47-73页 |
·实验材料 | 第47-51页 |
·实验动物 | 第47页 |
·菌种和载体 | 第47页 |
·主要试剂 | 第47-48页 |
·实验所用培养基和溶液 | 第48-51页 |
·仪器与设备 | 第51页 |
·实验方法 | 第51-64页 |
·重组原核表达载体的构建 | 第51-55页 |
·重组质粒的诱导表达 | 第55-56页 |
·表达产物的SDS-PAGE 电泳 | 第56-57页 |
·重组蛋白表达条件的优化 | 第57-58页 |
·表达蛋白的可溶性分析和包涵体的收集与纯化 | 第58-61页 |
·多克隆抗体的制备和特性分析 | 第61-64页 |
·结果 | 第64-70页 |
·PCR 扩增 | 第64页 |
·表达质粒的鉴定 | 第64-65页 |
·表达产物的SDS-PAGE 电泳 | 第65-67页 |
·重组蛋白的可溶性分析 | 第67-68页 |
·表达产物的纯化 | 第68-69页 |
·Western-Blot 分析 | 第69页 |
·重组蛋白免疫血清的间接免疫荧光检测 | 第69-70页 |
·讨论 | 第70-73页 |
第四章 重组F 蛋白对山羊的免疫效果试验 | 第73-76页 |
·材料 | 第73页 |
·抗原及实验动物 | 第73页 |
·主要试剂及耗材 | 第73页 |
·主要试剂(同第三章3.1.3) | 第73页 |
·实验所用培养基和溶液(同第三章3.1.4) | 第73页 |
·仪器与设备(同第三章3.1.5) | 第73页 |
·试验方法 | 第73-75页 |
·实验动物及分组 | 第73-74页 |
·免疫山羊血清抗体效价的检测 | 第74-75页 |
·结果 | 第75页 |
·讨论 | 第75-76页 |
第五章 小反刍兽疫病毒F 基因单克隆抗体的研制及鉴定 | 第76-96页 |
·材料 | 第76-78页 |
·抗原、细胞系及实验动物 | 第76页 |
·主要试剂及耗材 | 第76页 |
·溶液及培养基的配制 | 第76-78页 |
·仪器与设备 | 第78页 |
·方法 | 第78-87页 |
·间接ELISA 法确定最佳抗原包被量及酶标二抗稀释度 | 第79页 |
·动物免疫 | 第79-80页 |
·细胞融合 | 第80-82页 |
·间接ELISA 筛选阳性杂交瘤细胞 | 第82页 |
·杂交瘤细胞株的建立 | 第82-83页 |
·单克隆抗体腹水的制备 | 第83-84页 |
·杂交瘤细胞及单克隆抗体特性的鉴定 | 第84-87页 |
·结果 | 第87-93页 |
·间接ELISA 法最佳抗原包被量及二抗稀释度的确定 | 第87页 |
·免疫小鼠抗体效价的检测 | 第87-88页 |
·杂交瘤细胞上清的ELISA 检测结果 | 第88-89页 |
·杂交瘤细胞及单抗特性鉴定 | 第89-93页 |
·讨论 | 第93-96页 |
·抗原 | 第93页 |
·动物选择和免疫 | 第93-94页 |
·饲养细胞制备 | 第94页 |
·细胞融合 | 第94页 |
·杂交瘤细胞的克隆化 | 第94-95页 |
·腹水制备 | 第95页 |
·杂交瘤细胞的染色体 | 第95-96页 |
第六章 全文结论 | 第96-97页 |
参考文献 | 第97-108页 |
致谢 | 第108-110页 |
作者简介 | 第110页 |