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小反刍兽疫病毒Nigeria 75/1株F基因的克隆、表达及应用研究

摘要第1-4页
Abstract第4-10页
第一章 绪言第10-28页
   ·病毒学研究第10-17页
     ·病毒的形态特征第10-11页
     ·理化特征第11页
     ·生物特性第11-12页
     ·分子生物学研究第12-16页
     ·PPRV 的复制第16-17页
   ·临床学研究第17-19页
     ·流行病学特点第17-18页
     ·临床症状第18页
     ·病理学变化第18-19页
   ·诊断方法研究进展第19-23页
     ·初步诊断第19页
     ·实验室诊断第19-23页
   ·PPR 的控制与预防第23-27页
     ·RP 弱毒疫苗第24页
     ·PPRV 弱毒疫苗第24-25页
     ·PPR 灭活疫苗第25页
     ·重组亚单位疫苗第25-26页
     ·嵌合体疫苗第26页
     ·活载体疫苗第26-27页
     ·RNA 干涉技术第27页
   ·展望第27-28页
第二章 小反刍兽疫病毒Nigeria 75/1 株F 基因的克隆第28-47页
   ·实验材料第28-32页
     ·病毒与细胞第28页
     ·菌株与载体第28页
     ·酶和主要试剂第28页
     ·实验所用溶液及其配制第28-31页
     ·仪器与设备第31-32页
   ·实验方法第32-40页
     ·Vero 细胞的培养第32-33页
     ·小反刍兽疫病毒在Vero 细胞中的增殖第33页
     ·引物的设计与合成第33-34页
     ·病毒RNA 的提取第34页
     ·反转录第34-35页
     ·目的片段的扩增和回收第35-36页
     ·目的基因与克隆载体的连接转化第36-38页
     ·重组质粒的提取与鉴定第38-40页
   ·结果第40-44页
     ·病毒的体外培养结果第40-41页
     ·F 基因扩增第41页
     ·重组质粒的PCR 鉴定第41页
     ·F 基因序列测定及编码蛋白结构预测第41-44页
   ·讨论第44-47页
     ·Vero 细胞的培养第44-45页
     ·病毒RNA 的提取第45-47页
第三章 小反刍兽疫病毒F 基因的原核表达及多克隆抗体的制备第47-73页
   ·实验材料第47-51页
     ·实验动物第47页
     ·菌种和载体第47页
     ·主要试剂第47-48页
     ·实验所用培养基和溶液第48-51页
     ·仪器与设备第51页
   ·实验方法第51-64页
     ·重组原核表达载体的构建第51-55页
     ·重组质粒的诱导表达第55-56页
     ·表达产物的SDS-PAGE 电泳第56-57页
     ·重组蛋白表达条件的优化第57-58页
     ·表达蛋白的可溶性分析和包涵体的收集与纯化第58-61页
     ·多克隆抗体的制备和特性分析第61-64页
   ·结果第64-70页
     ·PCR 扩增第64页
     ·表达质粒的鉴定第64-65页
     ·表达产物的SDS-PAGE 电泳第65-67页
     ·重组蛋白的可溶性分析第67-68页
     ·表达产物的纯化第68-69页
     ·Western-Blot 分析第69页
     ·重组蛋白免疫血清的间接免疫荧光检测第69-70页
   ·讨论第70-73页
第四章 重组F 蛋白对山羊的免疫效果试验第73-76页
   ·材料第73页
     ·抗原及实验动物第73页
     ·主要试剂及耗材第73页
     ·主要试剂(同第三章3.1.3)第73页
     ·实验所用培养基和溶液(同第三章3.1.4)第73页
     ·仪器与设备(同第三章3.1.5)第73页
   ·试验方法第73-75页
     ·实验动物及分组第73-74页
     ·免疫山羊血清抗体效价的检测第74-75页
   ·结果第75页
   ·讨论第75-76页
第五章 小反刍兽疫病毒F 基因单克隆抗体的研制及鉴定第76-96页
   ·材料第76-78页
     ·抗原、细胞系及实验动物第76页
     ·主要试剂及耗材第76页
     ·溶液及培养基的配制第76-78页
     ·仪器与设备第78页
   ·方法第78-87页
     ·间接ELISA 法确定最佳抗原包被量及酶标二抗稀释度第79页
     ·动物免疫第79-80页
     ·细胞融合第80-82页
     ·间接ELISA 筛选阳性杂交瘤细胞第82页
     ·杂交瘤细胞株的建立第82-83页
     ·单克隆抗体腹水的制备第83-84页
     ·杂交瘤细胞及单克隆抗体特性的鉴定第84-87页
   ·结果第87-93页
     ·间接ELISA 法最佳抗原包被量及二抗稀释度的确定第87页
     ·免疫小鼠抗体效价的检测第87-88页
     ·杂交瘤细胞上清的ELISA 检测结果第88-89页
     ·杂交瘤细胞及单抗特性鉴定第89-93页
   ·讨论第93-96页
     ·抗原第93页
     ·动物选择和免疫第93-94页
     ·饲养细胞制备第94页
     ·细胞融合第94页
     ·杂交瘤细胞的克隆化第94-95页
     ·腹水制备第95页
     ·杂交瘤细胞的染色体第95-96页
第六章 全文结论第96-97页
参考文献第97-108页
致谢第108-110页
作者简介第110页

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