| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 一 文献综述 | 第11-29页 |
| 1 microRNA | 第11-27页 |
| ·microRNA的发现及研究 | 第11-12页 |
| ·microRNA的特点 | 第12-13页 |
| ·microRNA的来源及生物合成 | 第13-15页 |
| ·miRNA的作用机制 | 第15-16页 |
| ·miRNA与siRNA | 第16-17页 |
| ·microRNAs在植物发育和抗逆过程中的各种功能 | 第17-19页 |
| ·microRNAs与植物生长发育的关系 | 第17-19页 |
| ·microRNAs对根的影响 | 第17-18页 |
| ·microRNAs对叶和茎的影响 | 第18页 |
| ·microRNAs对花发育的影响 | 第18页 |
| ·microRNAs对植物形态建成的影响 | 第18-19页 |
| ·microRNAs与植物抗逆性的关系 | 第19页 |
| ·microRNA的研究方法 | 第19-27页 |
| ·实验技术方法研究microRNA | 第20-23页 |
| ·应用杂交方法的microRNA表达检测 | 第20-22页 |
| ·PAGE/Northern杂交 | 第20-21页 |
| ·基因芯片技术 | 第21页 |
| ·核苷酸原位杂交 | 第21-22页 |
| ·应用PCR方法的microRNA表达检测 | 第22-23页 |
| ·microRNA克隆 | 第22页 |
| ·实时定量PCR | 第22-23页 |
| ·生物信息学方法研究microRNA | 第23-27页 |
| ·成熟miRNA的预测方法 | 第24-25页 |
| ·同源性搜索法 | 第24页 |
| ·物种同源比对法 | 第24-25页 |
| ·茎环结构邻位搜寻法 | 第25页 |
| ·利用靶序列反向搜寻法 | 第25页 |
| ·microRNA二级结构预测方法 | 第25-26页 |
| ·miRNA靶基因的预测方法 | 第26-27页 |
| 2 本研究的目的与意义 | 第27-29页 |
| 二 材料与方法 | 第29-43页 |
| 1 试验材料 | 第29-30页 |
| ·玉米供试材料 | 第29页 |
| ·纹枯病接菌菌种 | 第29页 |
| ·克隆载体及宿主菌 | 第29页 |
| ·使用的数据库及分析软件 | 第29页 |
| ·主要试剂 | 第29-30页 |
| ·试剂盒 | 第29-30页 |
| ·酶类及相关试剂 | 第30页 |
| ·实验主要仪器设备 | 第30页 |
| 2 实验方法 | 第30-43页 |
| ·miRNA的生物信息学分析 | 第30-31页 |
| ·玉米miRNA的搜索 | 第30-31页 |
| ·候选玉米miRNA的靶基因预测 | 第31页 |
| ·半定量的方法对预测得到的玉米microRNA前体进行检测 | 第31-36页 |
| ·试验材料的处理 | 第31-32页 |
| ·材料总RNA的提取 | 第32页 |
| ·将样品RNA进行反转录为cDNA | 第32-33页 |
| ·利用看家基因引物调整各样品cDNA浓度 | 第33-34页 |
| ·通过预测的前体设计引物并进行PCR扩增电泳检测 | 第34-35页 |
| ·琼脂糖电泳切胶回收目的片段 | 第35页 |
| ·回收片段进行克隆测序 | 第35-36页 |
| ·RNA加尾和引物延伸实时荧光定量PCR法实时定量检测microRNA | 第36-43页 |
| ·材料小分子RNA的分离 | 第36-38页 |
| ·miRNA的实时荧光定量PCR验证及表达分析 | 第38-43页 |
| 三 结果与分析 | 第43-66页 |
| 1 microRNA及microRNA靶基因的预测结果 | 第43-54页 |
| ·microRNA及其前体的预测结果 | 第43-48页 |
| ·microRNA靶基因的预测结果 | 第48-54页 |
| 2 预测得到的microRNA前体半定量结果 | 第54-58页 |
| ·材料总RNA的提取结果 | 第54页 |
| ·将样品RNA进行反转录为cDNA | 第54页 |
| ·利用看家基因引物调整各样品cDNA浓度 | 第54-55页 |
| ·前体半定量结果 | 第55-57页 |
| ·回收目的片段进行克隆测序结果 | 第57-58页 |
| 3 实时荧光定量PCR法实时定量检测microRNA结果 | 第58-66页 |
| ·普通PCR扩增及电泳检测 | 第58-60页 |
| ·克隆测序 | 第60页 |
| ·实时荧光定量PCR法实时定量 | 第60-65页 |
| ·实时荧光定量PCR的敏感性和特异性因素 | 第60-61页 |
| ·内参基因和各miRNA的标准曲线和熔解曲线 | 第61-62页 |
| ·各miRNA在R15和掖478接菌后的的不同部位的相对表达量 | 第62-65页 |
| ·miR165的相对表达量 | 第62-63页 |
| ·miR168b的相对表达量 | 第63页 |
| ·miR168b(*)的相对表达量 | 第63-64页 |
| ·miR173的相对表达量 | 第64页 |
| ·miR171的相对表达量 | 第64-65页 |
| ·miR319的相对表达量 | 第65页 |
| ·各miRNA的靶基因预测 | 第65-66页 |
| 四 讨论 | 第66-75页 |
| 1 miRNA生物信息学鉴定的优缺点 | 第66页 |
| 2 miR168与miR168~*的真实性讨论 | 第66-67页 |
| 3 上调表达的miRNA与玉米纹枯病的关系 | 第67-69页 |
| ·miRNA与Argonaute | 第68页 |
| ·miRNA与多聚半乳糖醛酸酶(PG) | 第68-69页 |
| ·miRNA与蛋白磷酸酶 | 第69页 |
| 4 下调表达的miRNA与玉米纹枯病的关系 | 第69-72页 |
| ·miRNA与植物细胞壁 | 第69-70页 |
| ·miRNA与蛋白质可逆磷酸化 | 第70-71页 |
| ·植物自身调控与谷胱甘肽-S-转移酶 | 第71页 |
| ·miRNA与激素 | 第71-72页 |
| ·miRNA与诱导相关蛋白 | 第72页 |
| 5 miRNA调控的玉米纹枯病抗病机制探讨 | 第72-73页 |
| 6 展望 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
