| 摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-18页 |
| 主要英文缩略词表 | 第18-20页 |
| 第一章 猪瘟及猪瘟病毒研究进展 | 第20-40页 |
| 1 病原学 | 第20-21页 |
| 2 理化特性 | 第21-22页 |
| 3 流行病学 | 第22-24页 |
| 4 临床症状与病理变化 | 第24-25页 |
| 5 致病机理 | 第25-27页 |
| 6 检测技术 | 第27-31页 |
| ·病原学诊断 | 第27-28页 |
| ·血清学检测 | 第28-31页 |
| 7 预防和控制 | 第31-35页 |
| ·猪瘟的传统疫苗和免疫程序 | 第31-32页 |
| ·猪瘟的控制与净化措施 | 第32-35页 |
| 参考文献 | 第35-40页 |
| 第二章 猪瘟病毒分子生物学研究进展 | 第40-68页 |
| 1 CSFV基因组结构 | 第40-43页 |
| 2 CSFV的编码蛋白及其功能 | 第43-50页 |
| ·Npro | 第44页 |
| ·C | 第44页 |
| ·E~(rns) (E0) | 第44-46页 |
| ·E1 | 第46页 |
| ·E2 | 第46-48页 |
| ·p7 | 第48页 |
| ·NS2、NS3 | 第48-49页 |
| ·NS4A、NS4B | 第49-50页 |
| ·NS5A、NS5B | 第50页 |
| 3 分子检测技术 | 第50-53页 |
| ·RT-PCR技术 | 第50-51页 |
| ·DNA探针技术 | 第51页 |
| ·DNA芯片 | 第51-52页 |
| ·LAMP检测技术 | 第52页 |
| ·实时荧光定量PCR技术(FQ-PCR) | 第52-53页 |
| ·PCR-ELISA | 第53页 |
| 4 新型疫苗 | 第53-61页 |
| ·亚单位疫苗 | 第54-55页 |
| ·病毒活载体疫苗 | 第55-56页 |
| ·DNA疫苗 | 第56-58页 |
| ·多肽疫苗 | 第58页 |
| ·CSFV全长感染性cDNA标记疫苗 | 第58-61页 |
| 参考文献 | 第61-68页 |
| 第三章 猪瘟病毒囊膜糖蛋白E0/1/2的克隆及其在293T细胞中的表达 | 第68-84页 |
| 1 材料与方法 | 第69-77页 |
| ·载体、菌种和细胞 | 第69页 |
| ·试剂 | 第69页 |
| ·引物设计和合成 | 第69页 |
| ·病毒增殖和基因扩增 | 第69-70页 |
| ·E0、E2和E012基因的克隆、序列测定和真核表达载体的构建 | 第70-73页 |
| ·重组质粒pcDNA-E0、pcDNA-E2和pcDNA-E012的大最提取 | 第73-74页 |
| ·重组质粒转染293T细胞 | 第74页 |
| ·转染细胞的裂解 | 第74-75页 |
| ·表达产物的鉴定 | 第75-77页 |
| 2 结果 | 第77页 |
| ·E0、E2和E012基因的扩增 | 第77页 |
| ·真核重组质粒构建与鉴定 | 第77页 |
| ·Western blot鉴定结果 | 第77页 |
| ·E0、E2和E012在293T细胞表面表达 | 第77页 |
| 3 讨论 | 第77-81页 |
| 参考文献 | 第81-84页 |
| 第四章 整合猪瘟病毒囊膜糖蛋白假型鼠白血病病毒的建立及其特性研究 | 第84-98页 |
| 1 材料与方法 | 第85-89页 |
| ·载体、菌种和细胞 | 第85页 |
| ·试剂 | 第85页 |
| ·质粒大提与纯化 | 第85-86页 |
| ·重组质粒共转染293T细胞 | 第86页 |
| ·假型病毒获得及纯化 | 第86页 |
| ·Western blot分析 | 第86-87页 |
| ·假病毒上清感染细胞 | 第87-88页 |
| ·MuLV-E012假病毒颗粒pH值依赖性测定 | 第88页 |
| ·MuLV-E012假病毒微量中和试验 | 第88-89页 |
| 2 结果 | 第89-90页 |
| ·E0、E2和E012在假病毒颗粒表面的表达 | 第89页 |
| ·假病毒感染性的测定 | 第89页 |
| ·纯化病毒的滴度 | 第89页 |
| ·MuLV-E012假病毒对pH的依赖性鉴定 | 第89-90页 |
| ·MuLV-E012假病毒微量中和试验 | 第90页 |
| 3 讨论 | 第90-95页 |
| 参考文献 | 第95-98页 |
| 第五章 猪瘟病毒囊膜糖蛋白E2 B细胞表位亚单位疫苗免疫效果研究 | 第98-114页 |
| 1 材料与方法 | 第99-102页 |
| ·菌株、毒株和抗体 | 第99页 |
| ·试剂和实验动物 | 第99页 |
| ·rE2-a、rE2-b和rE2-ba蛋白的表达及纯化 | 第99-100页 |
| ·纯化的重组蛋白rE2-a、rE2-b和rE2-ba的Western Blot分析 | 第100-101页 |
| ·纯化的重组蛋白rE2-a、rE2-b和rE2-ba的定量 | 第101页 |
| ·动物免疫 | 第101-102页 |
| ·统计学分析 | 第102页 |
| 2 结果 | 第102-104页 |
| ·工程菌(BL21-rE2-a、BL21-rE2-b和BL21-rE2-ba)的诱导表达 | 第102-103页 |
| ·重组蛋白rE2-a、rE2-b和rE2-ba的可溶性分析 | 第103页 |
| ·表达产物的纯化 | 第103页 |
| ·纯化的重组蛋白rE2-a、rE2-b和rE2-ba的Western Blot分析 | 第103页 |
| ·纯化的重组蛋白rE2-a、rE2-b和rE2-ba的定量 | 第103页 |
| ·中和抗体效价测定 | 第103页 |
| ·动物攻毒后的临床症状与保护率 | 第103-104页 |
| 3 讨论 | 第104-112页 |
| 参考文献 | 第112-114页 |
| 第六章 稳定表达猪瘟病毒衣壳蛋白和葡萄球菌核酸酶融合蛋白细胞系的建立及鉴定 | 第114-128页 |
| 1 材料与方法 | 第115-119页 |
| ·病毒、质粒与细胞 | 第115页 |
| ·抗体 | 第115页 |
| ·工具酶和主要试剂 | 第115页 |
| ·引物的设计与合成 | 第115-116页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第116-117页 |
| ·转染与G418抗性筛选 | 第117页 |
| ·融合蛋白的鉴定 | 第117-119页 |
| ·核酸酶活性分析 | 第119页 |
| 2 结果 | 第119-120页 |
| ·重组表达质粒pcDNA-Cap-SNase的构建 | 第119页 |
| ·G418压力筛选稳定表达融合蛋白Cap-SNase的PK-15细胞系 | 第119-120页 |
| ·表达的融合蛋白Cap-SNase的核酸酶活性分析 | 第120页 |
| 3 讨论 | 第120-125页 |
| 参考文献 | 第125-128页 |
| 第七章 应用衣壳蛋白靶向灭活策略抗猪瘟病毒感染研究 | 第128-140页 |
| 1 材料与方法 | 第128-132页 |
| ·病毒、质粒与细胞 | 第128-129页 |
| ·抗体 | 第129页 |
| ·工具酶和主要试剂 | 第129页 |
| ·猪瘟病毒石门株感染PK-15/Cap-SNase细胞系 | 第129页 |
| ·不同时间的子代病毒感染滴度测定 | 第129页 |
| ·SYBR Green Ⅰ real-time PCR对子代病毒基因组定量 | 第129-130页 |
| ·ELISA检测子代病毒颗粒抗原 | 第130-132页 |
| ·统计学分析 | 第132页 |
| 2 结果 | 第132页 |
| ·融合蛋白Cap-SNase的抗病毒效果 | 第132页 |
| ·病毒样颗粒中完整基因组含量分析 | 第132页 |
| ·猪瘟病毒的ELISA检测分析结果 | 第132页 |
| 3 讨论 | 第132-136页 |
| 参考文献 | 第136-140页 |
| 全文总结 | 第140-142页 |
| 致谢 | 第142-144页 |
| 攻读学位期间论文发表情况 | 第144页 |
