| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 第一章 引言 | 第13-28页 |
| 1.1 植物开花基因FT的发现 | 第13页 |
| 1.2 植物花期调控途径 | 第13-17页 |
| 1.2.1 光周期途径 | 第14-16页 |
| 1.2.2 春化途径 | 第16页 |
| 1.2.3 赤霉素途径 | 第16页 |
| 1.2.4 自主开花途径 | 第16-17页 |
| 1.2.5 多条开花途径的信号整合 | 第17页 |
| 1.3 大豆FT同源基因GmFT2a和 GmFT5a的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.4 大豆对不同纬度地区适应性的研究进展 | 第18-23页 |
| 1.4.1 大豆适应高纬度地区的分子机制 | 第19-22页 |
| 1.4.2 大豆适应低纬度地区的分子机制 | 第22-23页 |
| 1.5 基因组编辑技术CRISPR/Cas9 在大豆中的研究进展 | 第23-26页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第26-28页 |
| 第二章 利用CRISPR/Cas9 创制GmFT2a和 GmFT5a基因的定点突变植株 | 第28-55页 |
| 2.1 实验材料 | 第28页 |
| 2.1.1 大豆品种及菌株 | 第28页 |
| 2.1.2 试剂及耗材 | 第28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-42页 |
| 2.2.1 GmFT2a和 GmFT5a基因的CRISPR/Cas9 靶点序列选择 | 第28-29页 |
| 2.2.2 CRISPR/Cas9 载体构建 | 第29-31页 |
| 2.2.3 电击法转化根癌农杆菌EHA105 感受态细胞 | 第31-33页 |
| 2.2.4 根癌农杆菌介导的大豆遗传转化 | 第33-39页 |
| 2.2.5 大豆叶片组织DNA提取 | 第39页 |
| 2.2.6 检测CRISPR/Cas9 介导的定点突变类型 | 第39-41页 |
| 2.2.7 RNA的提取和反转录 | 第41-42页 |
| 2.2.8 荧光定量PCR | 第42页 |
| 2.3 结果与分析 | 第42-53页 |
| 2.3.1 CRISPR/Cas9 介导的GmFT2a基因定点突变效率及类型 | 第42-44页 |
| 2.3.2 潜在的脱靶位点检测 | 第44-46页 |
| 2.3.3 ft2a突变体植株的花期表型 | 第46-49页 |
| 2.3.4 T2代ft2a突变体中GmFT2a基因的表达模式 | 第49-50页 |
| 2.3.5 不含转基因元件的ft2a突变体植株的鉴定 | 第50-52页 |
| 2.3.6 CRISPR/Cas9 介导的GmFT5a基因定点突变效率及类型 | 第52-53页 |
| 2.4 讨论 | 第53-55页 |
| 2.4.1 CRISPR/Cas9 介导的基因定点突变在大豆世代间的遗传稳定性 | 第53-54页 |
| 2.4.2 潜在的脱靶效应 | 第54页 |
| 2.4.3 ft2a突变体的GmFT2a基因表达量降低 | 第54-55页 |
| 第三章 CRISPR/Cas9 介导的大豆基因组长片段删除 | 第55-71页 |
| 3.1 实验材料 | 第55-56页 |
| 3.1.1 大豆品种及菌株 | 第55-56页 |
| 3.1.2 试剂及耗材 | 第56页 |
| 3.2 实验方法 | 第56-62页 |
| 3.2.1 选择GmFT2a和 GmFT5a基因长片段删除的靶点序列 | 第56-58页 |
| 3.2.2 GmFT2a和 GmFT5a基因长片段删除的载体构建 | 第58-61页 |
| 3.2.3 检测CRISPR/Cas9 介导的GmFT2a和 GmFT5a基因长片段删除 | 第61-62页 |
| 3.3 结果与分析 | 第62-69页 |
| 3.3.1 每个靶点的突变频率及长片段删除的频率 | 第62-65页 |
| 3.3.2 长片段删除突变的遗传稳定性 | 第65-67页 |
| 3.3.3 GmFT2a长片段删除突变体的花期表型 | 第67-69页 |
| 3.4 讨论 | 第69-71页 |
| 第四章 GmFT2a和 GmFT5a在大豆花期调控的遗传效应差异 | 第71-93页 |
| 4.1 实验材料 | 第71页 |
| 4.1.1 大豆品种及菌株 | 第71页 |
| 4.1.2 试剂及耗材 | 第71页 |
| 4.2 实验方法 | 第71-79页 |
| 4.2.1 GmFT2a和 GmFT5a基因过表达植株的创制 | 第71-75页 |
| 4.2.2 ft2a ft5a双基因突变体的创制方法 | 第75-77页 |
| 4.2.3 大豆茎尖部位的RNA提取及反转录 | 第77-78页 |
| 4.2.4 大豆茎尖中开花相关基因的表达量检测 | 第78-79页 |
| 4.3 结果与分析 | 第79-91页 |
| 4.3.1 创制ft2a ft5a双基因突变体 | 第79-81页 |
| 4.3.2 长日照、短日照条件下GmFT2a和 GmFT5a在花期调控中的效应差异 | 第81-84页 |
| 4.3.3 GmFT5a基因在花期调控中效应改变的临界日长 | 第84-85页 |
| 4.3.4 SD和 LD条件下开花相关基因在大豆茎尖的表达量 | 第85-89页 |
| 4.3.5 短日照条件下ft2a ft5a双突变体的单株豆荚数和粒数增加 | 第89-91页 |
| 4.4 讨论 | 第91-93页 |
| 4.4.1 创制ft2a ft5a双基因突变体的两种方法优缺点比较 | 第91页 |
| 4.4.2 长日照、短日照条件下GmFT2a和 GmFT5a的效应差异 | 第91-92页 |
| 4.4.3 ft2a ft5a双突变体在低纬度地区有较大的种植潜力 | 第92-93页 |
| 第五章 全文结论 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-104页 |
| 附录 | 第104-110页 |
| 致谢 | 第110-111页 |
| 作者简历 | 第111页 |
