| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略表 | 第11-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-21页 |
| 1.1 鸡马立克氏病(MD) | 第12页 |
| 1.2 鸡马立克氏病病毒(MDV)及其基因组结构 | 第12-14页 |
| 1.3 MDV的主要功能基因 | 第14-15页 |
| 1.4 MDV的毒力演化 | 第15-17页 |
| 1.5 MDV的分子变异 | 第17-18页 |
| 1.6 MDV功能基因研究 | 第18-20页 |
| 1.7 本研究的目的意义 | 第20-21页 |
| 第二章 利用CRISPR/Cas9系统构建MDV meq基因缺失株的研究 | 第21-37页 |
| 2.1 材料 | 第21-22页 |
| 2.1.1 病毒和SPF鸡胚 | 第21页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第21页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第21-22页 |
| 2.2 方法 | 第22-28页 |
| 2.2.1 sgRNA的设计 | 第22页 |
| 2.2.2 pX330质粒酶切和胶回收 | 第22-23页 |
| 2.2.3 pMeq-sgRNA质粒构建 | 第23页 |
| 2.2.4 PCR检测引物设计及分布 | 第23-24页 |
| 2.2.5 pMeq-sgRNA初步筛选 | 第24页 |
| 2.2.6 pMD-18T-GFP质粒构建 | 第24-25页 |
| 2.2.7 pCAGGS-GFP质粒构建 | 第25-26页 |
| 2.2.8 MDV△Meq重组毒拯救及体外生物学特性分析 | 第26-27页 |
| 2.2.9 MDV荧光重组毒拯救 | 第27-28页 |
| 2.3 结果 | 第28-35页 |
| 2.3.1 pX330质粒酶切结果 | 第28页 |
| 2.3.2 pMeq-sgRNA初步筛选 | 第28页 |
| 2.3.3 pMD-18T-GFP质粒构建结果 | 第28-29页 |
| 2.3.4 pCAGGS-GFP质粒构建结果 | 第29-30页 |
| 2.3.5 MDV△Meq重组毒拯救结果 | 第30-33页 |
| 2.3.6 MDV荧光重组毒拯救结果 | 第33-35页 |
| 2.4 讨论 | 第35-37页 |
| 第三章 区分中国MDV野毒株与meq基因缺失株方法的建立 | 第37-49页 |
| 3.1 材料 | 第37页 |
| 3.1.1 病毒、SPF鸡胚和SPF鸡 | 第37页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第37页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第37页 |
| 3.2 方法 | 第37-41页 |
| 3.2.1 区分中国MDV野毒株与rBS△Meq株荧光定量PCR方法建立 | 第37-39页 |
| 3.2.2 区分中国MDV野毒株与rMS△Meq株荧光定量PCR方法建立 | 第39-41页 |
| 3.3 结果 | 第41-48页 |
| 3.3.1 区分中国MDV野毒株与rBS△Meq株荧光定量PCR方法建立 | 第41-43页 |
| 3.3.2 区分中国MDV野毒株与rMS△Meq株荧光定量PCR方法建立 | 第43-48页 |
| 3.4 讨论 | 第48-49页 |
| 第四章 全文结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
| 项目资助 | 第57-58页 |
| 作者简历 | 第58页 |
