| 摘要 | 第8-10页 |
| 英文摘要 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第13-19页 |
| 1.1 硒与硒蛋白 | 第13页 |
| 1.2 硒与肾脏组织 | 第13-14页 |
| 1.3 缺硒与细胞周期和细胞凋亡 | 第14页 |
| 1.4 缺硒与miRNA | 第14-15页 |
| 1.5 MiRNA概述 | 第15-16页 |
| 1.5.1 MiRNA介绍 | 第15页 |
| 1.5.2 MiRNA与细胞周期和细胞凋亡 | 第15-16页 |
| 1.6 ADAM10概述 | 第16-17页 |
| 1.7 实验目的与意义 | 第17-18页 |
| 1.8 实验路线 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-33页 |
| 2.1 主要仪器与试剂 | 第19-21页 |
| 2.1.1 主要仪器 | 第19-20页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第20-21页 |
| 2.2 试验方法 | 第21-32页 |
| 2.2.1 试验动物分组与采样 | 第21-22页 |
| 2.2.2 鸡肾脏组织超微结构的观察 | 第22页 |
| 2.2.3 RT-PCR法对缺硒鸡肾脏中miR-33-3p表达的检测 | 第22-24页 |
| 2.2.4 生物信息学方法预测miR-33-3p的靶基因 | 第24页 |
| 2.2.5 缺硒鸡肾脏中ADAM10及相关通路基因mRNA水平的检测 | 第24-26页 |
| 2.2.6 鸡胚原代肾细胞的培养 | 第26页 |
| 2.2.7 MiR-33-3p敲低和过表达体外培养鸡肾脏细胞模型的建立 | 第26-27页 |
| 2.2.8 MiR-33-3p靶基因ADAM10的鉴定 | 第27-29页 |
| 2.2.9 突变型ADAM103’UTR的pMIR-REPORT-ADAM10重组质粒的构建 | 第29页 |
| 2.2.10 荧光素酶报告基因检测试验 | 第29-30页 |
| 2.2.11 流式细胞术检测细胞周期 | 第30页 |
| 2.2.12 流式细胞术检测细胞凋亡 | 第30页 |
| 2.2.13 AO-EB染色法检测鸡胚原代肾细胞中凋亡水平 | 第30页 |
| 2.2.14 蛋白提取及westernblot | 第30-32页 |
| 2.3 试验数据的统计与分析 | 第32-33页 |
| 3 结果 | 第33-46页 |
| 3.1 鸡肾脏组织超微结构观察结果 | 第33-34页 |
| 3.2 缺硒对肉鸡肾脏miR-33-3p和ADAM10表达影响的检测结果 | 第34-35页 |
| 3.3 缺硒对肾脏组织中相关通路基因mRNA和蛋白表达影响的检测结果 | 第35-36页 |
| 3.4 Lipofectamine2000转染浓度检测结果 | 第36-38页 |
| 3.5 体外鸡胚原代肾细胞miR-33-3p的mimic和inhibitor模型的建立 | 第38页 |
| 3.6 MiR-33-3p靶基因ADAM10的验证结果 | 第38-40页 |
| 3.6.1 MiR-33-3p靶基因的预测结果 | 第38-39页 |
| 3.6.2 双荧光素酶报告基因验证靶基因的检测结果 | 第39-40页 |
| 3.7 敲低和过表达miR-33-3p后靶基因ADAM10mRNA及蛋白表达的检测结果 | 第40-41页 |
| 3.8 MiR-33-3p对鸡胚原代肾细胞相关通路基因mRNA和蛋白表达的检测结果 | 第41-43页 |
| 3.9 MiR-33-3p对细胞周期分布的影响 | 第43-44页 |
| 3.10 MiR-33-3p对凋亡的影响 | 第44页 |
| 3.11 AO-EB法检测细胞凋亡 | 第44-46页 |
| 4 讨论 | 第46-50页 |
| 4.1 缺硒对鸡肾脏组织结构的影响 | 第46页 |
| 4.2 缺硒对肾脏miR-33-3p表达影响 | 第46-47页 |
| 4.3 缺硒对鸡肾脏组织细胞周期和凋亡的影响 | 第47-48页 |
| 4.4 MiR-33-3p靶基因的预测与验证 | 第48页 |
| 4.5 MiR-33-3p对鸡胚原代肾细胞细胞周期及细胞凋亡的影响 | 第48-50页 |
| 5 结论 | 第50-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-60页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第60页 |
