| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 引言 | 第9-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-22页 |
| 1.1 昆虫免疫 | 第10-12页 |
| 1.2 模式识别受体 | 第12-16页 |
| 1.3 天然免疫对感染的应答 | 第16-19页 |
| 1.4 柞蚕病毒简介 | 第19-20页 |
| 1.5 研究技术路线 | 第20-21页 |
| 1.6 研究目的及意义 | 第21-22页 |
| 2 柞蚕凝集素基因的表达谱分析 | 第22-32页 |
| 2.1 引言 | 第22页 |
| 2.2 实验材料和试剂 | 第22-23页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第22页 |
| 2.2.2 主要生化试剂 | 第22页 |
| 2.2.3 主要溶液配制 | 第22-23页 |
| 2.3 实验方法 | 第23-26页 |
| 2.3.1 实时定量PCR引物的设计 | 第23-24页 |
| 2.3.2 柞蚕蛹的诱导 | 第24-25页 |
| 2.3.3 柞蚕蛹组织RNA的提取和cDNA的合成 | 第25-26页 |
| 2.3.4 柞蚕凝集素基因诱导表达的实时定量PCR检测 | 第26页 |
| 2.4 结果与分析 | 第26-30页 |
| 2.4.1 RNA的纯度检测 | 第26-27页 |
| 2.4.2 柞蚕凝集因素基因在不同病原微生物处理下的表达谱分析 | 第27-30页 |
| 2.5 讨论 | 第30-31页 |
| 2.6 小结 | 第31-32页 |
| 3 柞蚕ApCTL基因的克隆及生物信息学分析 | 第32-46页 |
| 3.1 引言 | 第32页 |
| 3.2 实验材料与试剂 | 第32-33页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第32页 |
| 3.2.2 主要生化试剂 | 第32页 |
| 3.2.3 常用溶液配制 | 第32-33页 |
| 3.3 实验方法 | 第33-37页 |
| 3.3.1 柞蚕蛹诱导、RNA的提取及cDNA的合成 | 第33页 |
| 3.3.2 柞蚕ApCTL基因的克隆 | 第33-36页 |
| 3.3.3 柞蚕ApCTL基因生物信息学分析 | 第36页 |
| 3.3.4 基于同源建模的柞蚕ApCTL基因功能分析 | 第36-37页 |
| 3.4 结果与分析 | 第37-45页 |
| 3.4.1 柞蚕ApCTL基因的克隆 | 第37-38页 |
| 3.4.2 酶切鉴定 | 第38页 |
| 3.4.3 柞蚕ApCTL基因的序列分析 | 第38-40页 |
| 3.4.4 蛋白质性质分析 | 第40-41页 |
| 3.4.5 柞蚕ApCTL基因同源性分析 | 第41-43页 |
| 3.4.6 同源建模功能分析 | 第43-45页 |
| 3.5 讨论 | 第45页 |
| 3.6 小结 | 第45-46页 |
| 4 柞蚕ApCTL基因表达载体的构建及重组病毒的筛选 | 第46-54页 |
| 4.1 引言 | 第46页 |
| 4.2 实验材料与试剂 | 第46-47页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第46页 |
| 4.2.2 工具酶与试剂 | 第46页 |
| 4.2.3 主要试剂配制 | 第46-47页 |
| 4.3 实验方法 | 第47-49页 |
| 4.3.1 转移表达载体pApM748BE-CTL的构建 | 第47页 |
| 4.3.2 昆虫Tn-Hi5细胞的复苏与培养 | 第47-48页 |
| 4.3.3 转移表达载体质粒pApM748BE-CTL与重组病毒ApNPV-Δph/egfp~+基因组DNA共转染 | 第48页 |
| 4.3.4 重组病毒ApNPV-CTL的筛选与PCR鉴定 | 第48-49页 |
| 4.4 结果与分析 | 第49-53页 |
| 4.4.1 ApNPV转移表达载体pApM748BE-CTL的构建与鉴定 | 第49-51页 |
| 4.4.2 共转染与重组病毒的筛选结果 | 第51-52页 |
| 4.4.3 重组病毒ApNPV-Δph/Δegfp/CTL的鉴定 | 第52-53页 |
| 4.5 讨论 | 第53页 |
| 4.6 小结 | 第53-54页 |
| 5 柞蚕重组ApCTL凝集素蛋白表达纯化与活性检测 | 第54-68页 |
| 5.1 引言 | 第54页 |
| 5.2 实验材料与试剂 | 第54-57页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第54页 |
| 5.2.2 主要溶液配制 | 第54-57页 |
| 5.3 实验方法 | 第57-62页 |
| 5.3.1 重组凝集素蛋白ApCTL在柞蚕体内的表达 | 第57-58页 |
| 5.3.2 发病柞蚕蛹预处理 | 第58页 |
| 5.3.3 重组凝集素ApCTL纯化方法的初步建立 | 第58-60页 |
| 5.3.4 重组凝集素ApCTL的鉴定 | 第60-61页 |
| 5.3.5 重组凝集素ApCTL凝集活性检测 | 第61-62页 |
| 5.4 结果与分析 | 第62-66页 |
| 5.4.1 重组凝集素ApCTL的硫酸铵沉淀 | 第62-63页 |
| 5.4.2 重组凝集素ApCTL镍柱亲和层析 | 第63-64页 |
| 5.4.3 重组凝集素ApCTL凝胶过滤层析 | 第64页 |
| 5.4.4 重组凝集素ApCTL凝菌活性检测 | 第64-65页 |
| 5.4.5 重组凝集素ApCTL凝血活性检测 | 第65-66页 |
| 5.5 讨论 | 第66-67页 |
| 5.6 小结 | 第67-68页 |
| 结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-76页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
