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柞蚕凝集素基因ApCTL的克隆及表达分析

摘要第3-4页
Abstract第4-5页
引言第9-10页
1 文献综述第10-22页
    1.1 昆虫免疫第10-12页
    1.2 模式识别受体第12-16页
    1.3 天然免疫对感染的应答第16-19页
    1.4 柞蚕病毒简介第19-20页
    1.5 研究技术路线第20-21页
    1.6 研究目的及意义第21-22页
2 柞蚕凝集素基因的表达谱分析第22-32页
    2.1 引言第22页
    2.2 实验材料和试剂第22-23页
        2.2.1 实验材料第22页
        2.2.2 主要生化试剂第22页
        2.2.3 主要溶液配制第22-23页
    2.3 实验方法第23-26页
        2.3.1 实时定量PCR引物的设计第23-24页
        2.3.2 柞蚕蛹的诱导第24-25页
        2.3.3 柞蚕蛹组织RNA的提取和cDNA的合成第25-26页
        2.3.4 柞蚕凝集素基因诱导表达的实时定量PCR检测第26页
    2.4 结果与分析第26-30页
        2.4.1 RNA的纯度检测第26-27页
        2.4.2 柞蚕凝集因素基因在不同病原微生物处理下的表达谱分析第27-30页
    2.5 讨论第30-31页
    2.6 小结第31-32页
3 柞蚕ApCTL基因的克隆及生物信息学分析第32-46页
    3.1 引言第32页
    3.2 实验材料与试剂第32-33页
        3.2.1 实验材料第32页
        3.2.2 主要生化试剂第32页
        3.2.3 常用溶液配制第32-33页
    3.3 实验方法第33-37页
        3.3.1 柞蚕蛹诱导、RNA的提取及cDNA的合成第33页
        3.3.2 柞蚕ApCTL基因的克隆第33-36页
        3.3.3 柞蚕ApCTL基因生物信息学分析第36页
        3.3.4 基于同源建模的柞蚕ApCTL基因功能分析第36-37页
    3.4 结果与分析第37-45页
        3.4.1 柞蚕ApCTL基因的克隆第37-38页
        3.4.2 酶切鉴定第38页
        3.4.3 柞蚕ApCTL基因的序列分析第38-40页
        3.4.4 蛋白质性质分析第40-41页
        3.4.5 柞蚕ApCTL基因同源性分析第41-43页
        3.4.6 同源建模功能分析第43-45页
    3.5 讨论第45页
    3.6 小结第45-46页
4 柞蚕ApCTL基因表达载体的构建及重组病毒的筛选第46-54页
    4.1 引言第46页
    4.2 实验材料与试剂第46-47页
        4.2.1 实验材料第46页
        4.2.2 工具酶与试剂第46页
        4.2.3 主要试剂配制第46-47页
    4.3 实验方法第47-49页
        4.3.1 转移表达载体pApM748BE-CTL的构建第47页
        4.3.2 昆虫Tn-Hi5细胞的复苏与培养第47-48页
        4.3.3 转移表达载体质粒pApM748BE-CTL与重组病毒ApNPV-Δph/egfp~+基因组DNA共转染第48页
        4.3.4 重组病毒ApNPV-CTL的筛选与PCR鉴定第48-49页
    4.4 结果与分析第49-53页
        4.4.1 ApNPV转移表达载体pApM748BE-CTL的构建与鉴定第49-51页
        4.4.2 共转染与重组病毒的筛选结果第51-52页
        4.4.3 重组病毒ApNPV-Δph/Δegfp/CTL的鉴定第52-53页
    4.5 讨论第53页
    4.6 小结第53-54页
5 柞蚕重组ApCTL凝集素蛋白表达纯化与活性检测第54-68页
    5.1 引言第54页
    5.2 实验材料与试剂第54-57页
        5.2.1 实验材料第54页
        5.2.2 主要溶液配制第54-57页
    5.3 实验方法第57-62页
        5.3.1 重组凝集素蛋白ApCTL在柞蚕体内的表达第57-58页
        5.3.2 发病柞蚕蛹预处理第58页
        5.3.3 重组凝集素ApCTL纯化方法的初步建立第58-60页
        5.3.4 重组凝集素ApCTL的鉴定第60-61页
        5.3.5 重组凝集素ApCTL凝集活性检测第61-62页
    5.4 结果与分析第62-66页
        5.4.1 重组凝集素ApCTL的硫酸铵沉淀第62-63页
        5.4.2 重组凝集素ApCTL镍柱亲和层析第63-64页
        5.4.3 重组凝集素ApCTL凝胶过滤层析第64页
        5.4.4 重组凝集素ApCTL凝菌活性检测第64-65页
        5.4.5 重组凝集素ApCTL凝血活性检测第65-66页
    5.5 讨论第66-67页
    5.6 小结第67-68页
结论第68-69页
参考文献第69-76页
攻读硕士学位期间发表学术论文情况第76-77页
致谢第77-78页

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