| 本文主要缩略语表 | 第4-13页 |
| 摘要 | 第13-14页 |
| Abstract | 第14-15页 |
| 1. 前言 | 第16-26页 |
| 1.1 胆管癌研究概况 | 第16-20页 |
| 1.1.1 胆管癌的流行病学概况与危险因素 | 第16-17页 |
| 1.1.2 胆管癌诊断与治疗 | 第17-18页 |
| 1.1.3 胆管癌发生发展的分子机制 | 第18-20页 |
| 1.2 DSG研究现状 | 第20-24页 |
| 1.2.1 DSG的结构与来源 | 第20-21页 |
| 1.2.2 DSG的药用功效 | 第21-23页 |
| 1.2.3 DSG的抗肿瘤机理 | 第23-24页 |
| 1.3 本论文的研究内容与研究意义 | 第24-26页 |
| 1.3.1 研究内容 | 第24页 |
| 1.3.2 研究意义 | 第24-26页 |
| 2. 材料和方法 | 第26-33页 |
| 2.1 主要实验材料及试剂 | 第26-31页 |
| 2.2 实验试剂 | 第31-33页 |
| 3. 实验方法 | 第33-46页 |
| 3.1 细胞培养相关技术 | 第33-34页 |
| 3.1.1 胆管癌细胞的培养和传代 | 第33页 |
| 3.1.2 细胞复苏 | 第33页 |
| 3.1.3 细胞冻存 | 第33-34页 |
| 3.2 MTS法测定DSG对胆管癌细胞的生长抑制作用 | 第34-35页 |
| 3.3 细胞染色观察 | 第35页 |
| 3.3.1 普通光学显微镜观察细胞形态变化 | 第35页 |
| 3.3.2 Hoechst 33258染色观察 | 第35页 |
| 3.3.3 AO/EB染色观察 | 第35页 |
| 3.4 集落形成实验 | 第35-36页 |
| 3.5 细胞线粒体分离 | 第36-37页 |
| 3.6 PI单染FCM检测细胞周期变化 | 第37页 |
| 3.7 FITC-Annexin V/PI双染FCM检测细胞凋亡 | 第37-38页 |
| 3.8 Western blot法 | 第38-39页 |
| 3.8.1 总蛋白质提取 | 第38页 |
| 3.8.2 BCA法测定蛋白浓度 | 第38页 |
| 3.8.3 蛋白质的免疫印迹法 | 第38-39页 |
| 3.9 实时荧光定量PCR | 第39-42页 |
| 3.9.1 细胞总RNA的提取 | 第39-40页 |
| 3.9.2 第一链cDNA的合成 | 第40-41页 |
| 3.9.3 RT-PCR检测基因表达变化 | 第41-42页 |
| 3.10 裸鼠体外移植瘤模型的建立及体内用药 | 第42-43页 |
| 3.10.1 人胆管癌细胞HuCCT1移植瘤模型的建立 | 第42页 |
| 3.10.2 接瘤裸鼠分组与给药 | 第42页 |
| 3.10.3 数据分析公式 | 第42-43页 |
| 3.11 苏木素-伊红染色法 | 第43-44页 |
| 3.12 免疫组织化学法 | 第44-46页 |
| 4. 实验结果 | 第46-71页 |
| 4.1 DSG抑制胆管癌细胞增殖 | 第46-48页 |
| 4.2 DSG改变胆管癌细胞形态并诱发凋亡 | 第48-50页 |
| 4.2.1 普通光镜观察DSG影响胆管癌细胞形态 | 第48-49页 |
| 4.2.2 荧光显微镜下Hoechst 33258染色观察 | 第49-50页 |
| 4.2.3 荧光显微镜下AO/EB染色观察 | 第50页 |
| 4.3 DSG抑制胆管癌细胞克隆形成 | 第50-52页 |
| 4.4 DSG经细胞周期阻滞抑制胆管癌细胞增殖 | 第52-55页 |
| 4.4.1 DSG引起胆管癌细胞周期阻滞 | 第52-53页 |
| 4.4.2 DSG对细胞周期相关因子转录和蛋白水平的影响 | 第53-55页 |
| 4.5 DSG促进胆管癌细胞发生凋亡 | 第55-62页 |
| 4.5.1 Annexin V/PI双染定量检测细胞凋亡 | 第55-57页 |
| 4.5.2 DSG对凋亡相关蛋白表达的影响 | 第57-58页 |
| 4.5.3 DSG通过内源性线粒体途径诱导胆管癌细胞凋亡 | 第58-59页 |
| 4.5.4 DSG通过Caspase依赖途径诱导胆管癌细胞凋亡 | 第59-60页 |
| 4.5.5 GSK3β/β-catenin信号通路参与DSG对胆管癌细胞的促凋亡作用 | 第60-62页 |
| 4.6 DSG对胆管癌细胞HuCCT1裸鼠移植瘤的生长抑制 | 第62-71页 |
| 4.6.1 DSG对裸鼠体内移植瘤体积和重量的影响 | 第62-65页 |
| 4.6.2 DSG对裸鼠体重无显著影响 | 第65-66页 |
| 4.6.3 DSG对移植瘤组织病理形态学分析 | 第66-67页 |
| 4.6.4 DSG对裸鼠体内五脏的影响 | 第67-68页 |
| 4.6.5 PCNA和Ki67在裸鼠肿瘤组织中表达差异分析 | 第68-69页 |
| 4.6.6 裸鼠肿瘤组织中相关蛋白表达差异分析 | 第69-71页 |
| 5. 讨论 | 第71-76页 |
| 5.1 DSG对胆管癌细胞增殖抑制作用 | 第71页 |
| 5.2 DSG引起胆管癌细胞周期阻滞 | 第71-72页 |
| 5.3 DSG促进胆管癌细胞发生凋亡的体外分子机制探究 | 第72-74页 |
| 5.3.1 DSG体外促进胆管癌发生凋亡 | 第72页 |
| 5.3.2 DSG通过线粒体途径诱导胆管癌细胞发生凋亡 | 第72-73页 |
| 5.3.3 DSG或经GSK3β/β-catenin信号通路引起胆管癌细胞发生凋亡 | 第73-74页 |
| 5.4 DSG抑制胆管癌细胞克隆形成能力 | 第74页 |
| 5.5 DSG对胆管癌细胞HuCCT1裸鼠移植瘤的抑制作用 | 第74-76页 |
| 6. 结论 | 第76-77页 |
| 创新点 | 第77-78页 |
| 展望 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-89页 |
| 在学期间参与发表的论文 | 第89-90页 |
| 致谢 | 第90页 |
