| 摘要 | 第7-9页 |
| 第一章 综述 | 第9-18页 |
| 1 哺乳动物卵泡的发育与功能 | 第9-10页 |
| 2 颗粒细胞 | 第10-11页 |
| 3 卵泡发育相关激素及生长因子 | 第11-14页 |
| 3.1 卵泡刺激素 | 第11-12页 |
| 3.2 雌性激素 | 第12页 |
| 3.3 胰岛素和胰岛素样生长因子 | 第12-13页 |
| 3.4 类固醇激素的调控 | 第13-14页 |
| 4 PRSS23研究进展 | 第14-17页 |
| 4.1 蛋白酶概述 | 第14页 |
| 4.2 丝氨酸蛋白酶(PRSS) | 第14页 |
| 4.3 卵巢上蛋白酶的作用 | 第14页 |
| 4.4 丝氨酸蛋白酶(PRSS)在卵巢上的作用 | 第14-15页 |
| 4.5 PRSS23的结构分布及功能 | 第15-17页 |
| 5 本研究目的和意义 | 第17-18页 |
| 第二章 牛卵泡PRSS23 CDS序列克隆及生物信息学分析 | 第18-27页 |
| 1 材料与方法 | 第18-22页 |
| 1.1 试验材料 | 第18-19页 |
| 1.1.1 样品采集 | 第18页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第18页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第18-19页 |
| 1.2 试验方法 | 第19-22页 |
| 1.2.1 提取总RNA | 第19页 |
| 1.2.2 检测总RNA纯度和浓度 | 第19页 |
| 1.2.3 牛PRSS23基因CDS序列扩增 | 第19-20页 |
| 1.2.4 牛PRSS23基因PCR扩增产物纯化 | 第20-21页 |
| 1.2.5 牛PRSS23基因克隆测序 | 第21页 |
| 1.2.6 PRSS23基因生物信息学分析 | 第21-22页 |
| 2 结果与分析 | 第22-26页 |
| 2.1 牛卵泡颗粒细胞总RNA纯度 | 第22页 |
| 2.2 牛PRSS23 CDS序列扩增产物 | 第22页 |
| 2.3 牛PRSS23基因测序 | 第22-23页 |
| 2.4 牛PRSS23基因生物信息学分析 | 第23-26页 |
| 2.4.1 预测牛PRSS23信号肽和跨膜结构域 | 第23-24页 |
| 2.4.2 预测牛PRSS23糖基化位点和磷酸化位点 | 第24页 |
| 2.4.3 预测牛PRSS23蛋白功能结构域 | 第24-25页 |
| 2.4.4 牛PRSS23序列相似性及聚类分析 | 第25-26页 |
| 3 讨论 | 第26页 |
| 4 小结 | 第26-27页 |
| 第三章 牛卵泡PRSS23 mRNA表达及其蛋白表达和定位 | 第27-37页 |
| 1 材料与方法 | 第27-31页 |
| 1.1 试验材料 | 第27-28页 |
| 1.1.1 样品采集 | 第27页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第27页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第27-28页 |
| 1.2 试验方法 | 第28-31页 |
| 1.2.1 竞争性ELISA法测定卵泡液E_2和P_4浓度 | 第28页 |
| 1.2.2 建立荧光定量PCR反应体系 | 第28-29页 |
| 1.2.3 免疫组织化学分析 | 第29-30页 |
| 1.2.4 Western blotting | 第30-31页 |
| 2 结果与分析 | 第31-35页 |
| 2.1 优势及从属卵泡的确定 | 第31-32页 |
| 2.2 PRSS23 mRNA在优势及从属卵泡中的表达差异 | 第32-33页 |
| 2.3 PRSS23免疫组织化学表达定位 | 第33-34页 |
| 2.4 牛卵泡PRSS23蛋白表达量分析 | 第34-35页 |
| 3 讨论 | 第35-36页 |
| 4 小结 | 第36-37页 |
| 第四章 牛卵泡颗粒细胞PRSS23基因功能研究 | 第37-46页 |
| 1 材料与方法 | 第37-40页 |
| 1.1 试验材料 | 第37-38页 |
| 1.1.1 样品采集 | 第37页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第37-38页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第38页 |
| 1.1.4 配制MEMα细胞培养液 | 第38页 |
| 1.1.5 配制DMEM-F12细胞培养液 | 第38页 |
| 1.2 试验方法 | 第38-40页 |
| 1.2.1 分离卵泡并收集颗粒细胞 | 第38页 |
| 1.2.2 制作细胞爬片及培养颗粒细胞 | 第38-39页 |
| 1.2.3 颗粒细胞PRSS23基因沉默 | 第39页 |
| 1.2.4 qRT-PCR检测牛卵泡颗粒细胞PRSS23 mRNA表达水平 | 第39页 |
| 1.2.5 测定颗粒细胞培养液E_2浓度 | 第39页 |
| 1.2.6 一步法TUNEL细胞凋亡检测 | 第39-40页 |
| 2 结果与分析 | 第40-44页 |
| 2.1 牛卵泡颗粒细胞转染效果 | 第40-41页 |
| 2.2 牛卵泡颗粒细胞PRSS23基因沉默效果 | 第41-42页 |
| 2.3 不同组牛卵泡颗粒细胞培养液E_2浓度差异性分析 | 第42页 |
| 2.4 基因沉默对牛卵泡颗粒细胞凋亡情况的影响 | 第42-44页 |
| 3 讨论 | 第44-45页 |
| 4 小结 | 第45-46页 |
| 全文结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-53页 |
| Abstract | 第53-54页 |
| 致谢 | 第55页 |
