| 第一部分中文摘要 | 第5-6页 |
| 第一部分英文摘要 | 第6-8页 |
| 第二部分中文摘要 | 第8-9页 |
| 第二部分英文摘要 | 第9-16页 |
| 第一部分 OCA2基因rs74653330位点突变的黑色素细胞模型构建 | 第16-54页 |
| 第一章 绪论 | 第16-22页 |
| 1.1 人类皮肤颜色 | 第16页 |
| 1.2 人类皮肤颜色的进化假说 | 第16-19页 |
| 1.2.1 肤色加深的选择假说 | 第16-18页 |
| 1.2.1.1 渗透性屏障假说 | 第17页 |
| 1.2.1.2 保护汗腺和皮肤血管 | 第17页 |
| 1.2.1.3 防止皮肤癌 | 第17-18页 |
| 1.2.1.4 防止叶酸光解 | 第18页 |
| 1.2.2 肤色变浅的选择假说 | 第18-19页 |
| 1.2.2.1 维生素D与维生素D假说 | 第18-19页 |
| 1.2.2.2 性选择假说 | 第19页 |
| 1.2.2.3 代谢能量保守的假说 | 第19页 |
| 1.3 肤色的遗传学解释 | 第19-21页 |
| 1.4 研究意义 | 第21-22页 |
| 第二章 实验材料 | 第22-26页 |
| 2.1 实验仪器与设备 | 第22-23页 |
| 2.2 实验试剂与药品 | 第23-24页 |
| 2.3 实验质粒与菌种 | 第24页 |
| 2.4 溶液配制 | 第24-26页 |
| 2.4.1 LB液体培养基 | 第24页 |
| 2.4.2 LB固体培养基 | 第24-25页 |
| 2.4.3 50 ×TAE电泳缓冲液 | 第25页 |
| 2.4.4 0.1 %明胶 | 第25页 |
| 2.4.5 细胞完全培养基 | 第25页 |
| 2.4.6 细胞冻存培养基 | 第25页 |
| 2.4.7 无钙镁离子磷酸盐缓冲液(1×PBS) | 第25-26页 |
| 第三章 CRISPR/Cas9介导的靶向基因编辑质粒的构建 | 第26-34页 |
| 3.1 gRNA的设计以及Oligos的合成 | 第26-27页 |
| 3.2 靶向基因编辑质粒的构建 | 第27-34页 |
| 3.2.1 pX459质粒提取 | 第27-29页 |
| 3.2.3 酶切质粒纯化 | 第29-30页 |
| 3.2.4 纯化的酶切质粒与Oligos连接 | 第30页 |
| 3.2.5 转化 | 第30-31页 |
| 3.2.6 挑取单克隆以及菌液PCR | 第31-32页 |
| 3.2.7 测序 | 第32页 |
| 3.2.8 去内毒素提取重组质粒 | 第32-34页 |
| 第四章 A375细胞转染条件的优化 | 第34-37页 |
| 4.1 A375细胞的培养 | 第34-35页 |
| 4.1.1 A375细胞的复苏 | 第34页 |
| 4.1.2 A375细胞的传代 | 第34-35页 |
| 4.1.3 A375细胞的冻存 | 第35页 |
| 4.2 A375细胞转染条件的优化 | 第35-37页 |
| 第五章 A2058细胞筛选与转染条件的优化 | 第37-48页 |
| 5.1 A2058细胞的培养 | 第37-38页 |
| 5.1.1 A2058细胞的复苏 | 第37页 |
| 5.1.2 A2058细胞的传代 | 第37-38页 |
| 5.1.3 A2058细胞的冻存 | 第38页 |
| 5.2 A2058细胞筛选条件的优化 | 第38-41页 |
| 5.3 A2058细胞转染条件的优化 | 第41-44页 |
| 5.4 gRNA基因编辑效率的测定 | 第44-48页 |
| 5.4.1 转染 | 第44页 |
| 5.4.2 目的序列扩增 | 第44-45页 |
| 5.4.3 变性退火 | 第45-46页 |
| 5.4.4 T7E1错配酶检测 | 第46-48页 |
| 第六章 A2058细胞共转染以及筛选 | 第48-52页 |
| 6.1 设计共转染的ssDNA | 第48-49页 |
| 6.2 共转染 | 第49页 |
| 6.3 Puro筛选 | 第49页 |
| 6.4 流式细胞仪分选单克隆 | 第49-52页 |
| 第七章 讨论与总结 | 第52-54页 |
| 第二部分 先天性眼球震颤相关SNP位点的研究 | 第54-72页 |
| 第一章 绪论 | 第54-57页 |
| 第二章 实验材料 | 第57-59页 |
| 2.1 实验仪器与设备 | 第57页 |
| 2.2 实验试剂与药品 | 第57-59页 |
| 第三章 全外显子扫描分析 | 第59-61页 |
| 3.1 数据信息 | 第59页 |
| 3.2 数据分析 | 第59-61页 |
| 第四章 CN家系中相关SNP位点重测序 | 第61-66页 |
| 4.1 血液样本基因组DNA提取 | 第61-62页 |
| 4.2 引物设计 | 第62-63页 |
| 4.3 目的片段扩增 | 第63页 |
| 4.4 PCR产物纯化 | 第63-64页 |
| 4.5 测序PCR | 第64页 |
| 4.6 测序PCR产物纯化 | 第64-65页 |
| 4.7 变性 | 第65页 |
| 4.8 上机以及测序结果分析 | 第65-66页 |
| 第五章 结果与讨论 | 第66-72页 |
| 5.1 家系血液样本gDNA电泳结果 | 第66页 |
| 5.2 引物最适退火温度的确定 | 第66-67页 |
| 5.3 目的片段扩增电泳结果 | 第67页 |
| 5.4 测序结果 | 第67-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-80页 |
| 附录 ACN家系系谱图 | 第80-81页 |