| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 第1章 前言 | 第9-19页 |
| 1.1 聚酮化合物 | 第9-13页 |
| 1.1.1 聚酮化合物类型 | 第10-12页 |
| 1.1.2 聚酮化合物的组合生物学 | 第12-13页 |
| 1.2 脂肪酸合成酶FASⅡ抑制剂 | 第13页 |
| 1.3 Ⅱ型芳香聚酮化合物ABX结构 | 第13-15页 |
| 1.4 卤代化合物 | 第15-16页 |
| 1.5 Ⅱ型芳香聚酮化合物(-)ABX生物合成途径的推测 | 第16-17页 |
| 1.6 产生(+)-ABX的Streptomyces.sp.FXJ1.264 | 第17页 |
| 1.7 本课题研究的目的及意义 | 第17-19页 |
| 第2章 实验与方法 | 第19-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-23页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第19-20页 |
| 2.1.2 实验所用引物及序列 | 第20-21页 |
| 2.1.3 实验主要仪器 | 第21页 |
| 2.1.4 培养基 | 第21-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-32页 |
| 2.2.1 大肠杆菌和链霉菌菌种保藏 | 第23页 |
| 2.2.2 质粒的制备 | 第23-24页 |
| 2.2.3 感受态细胞的制备和转化 | 第24-25页 |
| 2.2.4 PCR分子克隆 | 第25-26页 |
| 2.2.5 DNA的回收 | 第26页 |
| 2.2.6 接合转移 | 第26-27页 |
| 2.2.7 蛋白的表达和纯化 | 第27页 |
| 2.2.8 PCRtagerting敲除目的片段 | 第27-28页 |
| 2.2.9 发酵实验 | 第28页 |
| 2.2.10 卤化酶在Streptomyces.sp.FXJ1.264的异源表达 | 第28-29页 |
| 2.2.11 硅胶色谱方法分离发酵产物 | 第29页 |
| 2.2.12 HPLC检测条件 | 第29-30页 |
| 2.2.13 卤化酶的体外测活 | 第30页 |
| 2.2.14 甲基转移酶的体外测活 | 第30-31页 |
| 2.2.15 抑菌活性的测定 | 第31页 |
| 2.2.16 本章小结 | 第31-32页 |
| 第3章 实验结果与分析 | 第32-45页 |
| 3.1 (-)-ABX生物合成基因簇的构建 | 第32-35页 |
| 3.1.1 ABX产生菌S.sp.MA6657a遗传操作系统的建立 | 第32页 |
| 3.1.2 S.sp.MA6657a基因文库的构建 | 第32-33页 |
| 3.1.3 (-)-ABX生物合成基因簇的确定 | 第33-35页 |
| 3.2 (-)-ABX生物合成基因簇4E10的异源表达 | 第35-37页 |
| 3.3 (-)-ABX生物合成基因簇功能的推测 | 第37页 |
| 3.4 (-)-ABX后修饰基因的分析 | 第37-44页 |
| 3.4.1 后修饰基因中甲基转移酶的敲除 | 第38-40页 |
| 3.4.2 后修饰基因中甲基转移酶体外表达及测活 | 第40-41页 |
| 3.4.3 后修饰基因中卤化酶体外表达测活 | 第41-43页 |
| 3.4.4 卤化酶体内敲除 | 第43-44页 |
| 3.5 对(+)-ABX生物合成相关基因簇的异源表达及回补H基因 | 第44-45页 |
| 第4章 发酵产物的纯化与鉴定 | 第45-58页 |
| 4.1 4E10-albus发酵培养代谢产物的分离纯化 | 第45-47页 |
| 4.2 △H/4E10-albus发酵培养代谢产物的分离纯化 | 第47页 |
| 4.3 △J/4E10-albus发酵培养代谢产物的分离纯化 | 第47-49页 |
| 4.4 Streptomyces.sp.FXJ1.264卤化酶回补发酵培养代谢产物的分离纯化 | 第49-51页 |
| 4.5 △N/4E10-albus发酵培养代谢产物的分离纯化 | 第51-55页 |
| 4.6 最低抑菌浓度(MIC) | 第55-58页 |
| 第5章 总结与展望 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-62页 |
| 附件 | 第62-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
