| 中文摘要 | 第3-10页 |
| 英文摘要 | 第10-17页 |
| 前言 | 第22-29页 |
| 第一章 细胞穿透肽的噬菌体展示技术筛选 | 第29-38页 |
| 1.1 材料 | 第29-31页 |
| 1.1.1 主要试剂及其配制 | 第29-30页 |
| 1.1.2 菌株和细胞株 | 第30页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第30-31页 |
| 1.2 方法 | 第31-33页 |
| 1.2.1 细胞培养 | 第31页 |
| 1.2.2 噬菌体展示环七肽库的滴度测定 | 第31-32页 |
| 1.2.3 内化入Hela细胞的噬菌体筛选 | 第32页 |
| 1.2.4 噬菌体单克隆的扩增制备 | 第32-33页 |
| 1.2.5 噬菌体单克隆DNA的PCR扩增 | 第33页 |
| 1.2.6 PCR产物的序列测定及氨基酸序列推导 | 第33页 |
| 1.3 结果 | 第33-35页 |
| 1.3.1 噬菌体展示环七肽库的库容量鉴定 | 第33-34页 |
| 1.3.2 噬菌体肽库的筛选及富集效果分析 | 第34页 |
| 1.3.3 噬菌体单克隆DNA的PCR扩增及测序 | 第34-35页 |
| 1.4 讨论 | 第35-38页 |
| 第二章 细胞穿透肽原核表达文库的构建及数据分析 | 第38-53页 |
| 2.1 材料 | 第38-39页 |
| 2.1.1 主要试剂及其配制 | 第38-39页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第39页 |
| 2.2 方法 | 第39-41页 |
| 2.2.1 内化噬菌体总DNA的提取 | 第39页 |
| 2.2.2 PCR产物的获得和文库载体的制备 | 第39页 |
| 2.2.3 电转感受态的制备 | 第39-40页 |
| 2.2.4 电击转化 | 第40页 |
| 2.2.5 穿透肽文库的筛选验证 | 第40-41页 |
| 2.3 结果 | 第41-50页 |
| 2.3.1 细胞穿透肽原核表达文库的库容量 | 第41页 |
| 2.3.2 噬菌体克隆的DNA序列测定及氨基酸序列推导 | 第41-42页 |
| 2.3.3 文库穿透肽的生物信息学分析 | 第42-50页 |
| 2.3.4 高丰度穿透肽的序列分析 | 第50页 |
| 2.4 讨论 | 第50-53页 |
| 第三章 高丰度细胞穿透肽的内化特点及机制研究 | 第53-86页 |
| 3.1 材料 | 第53-55页 |
| 3.1.1 主要试剂及其配制 | 第53-55页 |
| 3.1.2 细胞株、质粒和动物 | 第55页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第55页 |
| 3.2 方法 | 第55-63页 |
| 3.2.1 FITC标记多肽的合成 | 第55页 |
| 3.2.2 带有EGFP的融合表达载体的构建 | 第55-56页 |
| 3.2.3 带有EGFP的融合蛋白的原核表达和纯化 | 第56-57页 |
| 3.2.4 2-D Quant Kit法进行蛋白定量 | 第57页 |
| 3.2.5 台盼蓝法检测pDHY对Hela细胞膜完整性的影响 | 第57页 |
| 3.2.6 细胞系的传代培养 | 第57-58页 |
| 3.2.7 乳鼠原代心肌细胞的分离培养 | 第58页 |
| 3.2.8 穿透肽pDHY内化的细胞学实验 | 第58页 |
| 3.2.9 穿透肽pDHY内化的代谢定量实验 | 第58-59页 |
| 3.2.10 细胞内化抑制剂实验 | 第59页 |
| 3.2.11 带有链霉亲和素结合肽标签的原核表达载体的构建 | 第59页 |
| 3.2.12 带有链霉亲和素结合肽标签的融合蛋白的原核表达和纯化 | 第59页 |
| 3.2.13 Hela细胞荷瘤裸鼠模型的构建 | 第59-60页 |
| 3.2.14 Hela荷瘤组织细胞质膜和胞浆成分的分离 | 第60页 |
| 3.2.15 Hela荷瘤组织细胞质膜蛋白的制备 | 第60页 |
| 3.2.16 细胞质膜蛋白的Western-blot检测 | 第60-61页 |
| 3.2.17 串联亲和纯化技术Pull-down蛋白复合物 | 第61-62页 |
| 3.2.18 质谱兼容的蛋白银染 | 第62页 |
| 3.2.19 肽指纹图谱的质谱鉴定 | 第62-63页 |
| 3.2.20 统计学处理 | 第63页 |
| 3.3 结果 | 第63-82页 |
| 3.3.1 带有EGFP的融合表达载体的构建和蛋白表达纯化 | 第63-64页 |
| 3.3.2 pDHY内化特点的研究 | 第64-74页 |
| 3.3.3 pDHY内化机制的研究 | 第74-82页 |
| 3.4 讨论 | 第82-86页 |
| 第四章 高丰度细胞穿透肽的功能研究 | 第86-106页 |
| 4.1 材料 | 第86-87页 |
| 4.1.1 主要试剂及其配制 | 第86-87页 |
| 4.1.2 细胞株、质粒和动物 | 第87页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第87页 |
| 4.2 方法 | 第87-94页 |
| 4.2.1 带有Vp3基因的原核融合表达载体的构建 | 第87-88页 |
| 4.2.2 带有Vp3基因的融合蛋白的原核表达和纯化 | 第88-89页 |
| 4.2.3 细胞凋亡的形态学观察 | 第89-90页 |
| 4.2.4 细胞凋亡率的流式细胞检测 | 第90页 |
| 4.2.5 Q-PCR检测miR-200b-3p表达量 | 第90-92页 |
| 4.2.6 Western-blot检测p73表达量 | 第92-93页 |
| 4.2.7 台盼蓝法检测细胞毒性 | 第93页 |
| 4.2.8 CCK-8检测细胞增殖率 | 第93页 |
| 4.2.9 统计学处理 | 第93-94页 |
| 4.3 结果 | 第94-103页 |
| 4.3.1 带有Vp3基因的原核融合表达载体的构建 | 第94页 |
| 4.3.2 带有Vp3基因的融合蛋白的原核表达和纯化 | 第94-95页 |
| 4.3.3 细胞凋亡的形态学观察 | 第95-96页 |
| 4.3.4 细胞凋亡率的流式细胞检测 | 第96-97页 |
| 4.3.5 Q-PCR检测miR-200b-3p表达量 | 第97-98页 |
| 4.3.6 Western-blot检测p73表达量 | 第98-100页 |
| 4.3.7 台盼蓝法检测转染对细胞的毒性 | 第100-101页 |
| 4.3.8 CCK-8检测细胞增殖率 | 第101-103页 |
| 4.4 讨论 | 第103-106页 |
| 小结 | 第106-108页 |
| 参考文献 | 第108-112页 |
| 综述 | 第112-133页 |
| 参考文献 | 第126-133页 |
| 英文缩写词表 | 第133-135页 |
| 发表论文 | 第135-136页 |
| 中请专利 | 第136-137页 |
| 致谢 | 第137-139页 |
