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基于iTRAQ技术研究浮萍(Lemna minor)对铝(Al)胁迫的响应机制

摘要第3-5页
Abstract第5-6页
第一章 前言与综述第12-18页
    1 铝元素简介第12页
    2 铝污染与植物第12-16页
        2.1 铝污染第12页
        2.2 植物毒理第12-15页
            2.2.1 表观特征第12-13页
            2.2.2 矿质营养吸收第13页
            2.2.3 细胞结构第13-14页
                2.2.3.1 细胞壁第13-14页
                2.2.3.2 质膜第14页
                2.2.3.3 DNA和细胞核第14页
            2.2.4 抗氧化系统第14-15页
            2.2.5 植物光合作用第15页
        2.3 耐性机制第15-16页
            2.3.1 外部排斥机制第15-16页
            2.3.2 内部解毒机制第16页
    3 iTRAQ技术的特点及应用第16-17页
    4 本研究的目的与意义第17-18页
第二章 Al在浮萍体内的富集及其毒理学效应研究第18-36页
    1 材料与方法第18-22页
        1.1 材料培养与处理第18页
        1.2 实验方法第18-22页
            1.2.1 相对生长量第18页
            1.2.2 Al含量测定第18-19页
            1.2.3 光合色素含量测定第19页
            1.2.4 H_2O_2和O_2~(·-)组化染色第19页
            1.2.5 抗氧化酶活性测定第19-20页
            1.2.6 AsA-GSH循环物质的测定第20-21页
            1.2.7 SOD、 POD、 CAT和APX同工酶活性分析第21页
            1.2.8 NP-SH和PCs含量测定第21-22页
            1.2.9 可溶性蛋白含量测定第22页
            1.2.10 可溶性糖含量测定第22页
            1.2.11 统计分析第22页
    2 结果与分析第22-33页
        2.1 外观损伤第22-23页
        2.2 相对生长量第23页
        2.3 Al含量第23-24页
        2.4 光合色素第24-25页
        2.5 ROS组化染色第25-26页
            2.5.1 H_2O_2组化染色第25页
            2.5.2 O_2~(·-)组化染色第25-26页
        2.6 抗氧化酶活性第26-27页
            2.6.1 SOD活性第26页
            2.6.2 POD活性第26-27页
            2.6.3 CAT活性第27页
        2.7 AsA-GSH循环第27-30页
            2.7.1 APX活性第27页
            2.7.2 GR活性第27-28页
            2.7.3 DHAR活性第28-29页
            2.7.4 AsA和DHA第29-30页
            2.7.5 GSH和GSSG第30页
        2.8 SOD、POD、CAT和APX同工酶第30-31页
        2.9 NP-SH和PCs第31-32页
        2.10 可溶性蛋白含量第32页
        2.11 可溶性糖含量第32-33页
    3 讨论第33-36页
第三章 Al对浮萍蛋白质表达的影响第36-75页
    1 材料与方法第36-44页
        1.1 实验材料与处理第36页
        1.2 实验方法第36-44页
            1.2.1 iTRAQ蛋白组学测定第36-40页
                1.2.1.1 蛋白提取第36-37页
                1.2.1.2 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳第37页
                1.2.1.3 胰蛋白酶酶解及标记第37-38页
                1.2.1.4 2D-LC-MSMS分析第38-39页
                    1.2.1.4.1 反相色谱分离第38页
                    1.2.1.4.2 反向色谱-TripleTOF分析第38-39页
                1.2.1.5 数据库检索第39页
                1.2.1.6 原始数据整理第39页
                1.2.1.7 可信蛋白及差异蛋白筛选第39-40页
                1.2.1.8 GO功能分析及富集和COG分类第40页
                1.2.1.9 KEGG通路富集分析第40页
            1.2.2 Western-blot检测第40-41页
                1.2.2.1 叶绿体蛋白提取第40页
                1.2.2.2 SDS-PAGE电泳第40页
                1.2.2.3 转膜第40-41页
                1.2.2.4 封闭PVDF膜的免疫球蛋白结合位点第41页
                1.2.2.5 免疫检测第41页
                1.2.2.6 酶联抗体与生色底物的反应第41页
            1.2.3 qRT-PCR第41-44页
                1.2.3.1 RNA提取第41-42页
                1.2.3.2 cDNA的合成第42页
                1.2.3.3 qRT-PCR检测基因表达水平第42-44页
    2 结果与分析第44-68页
        2.1 SDS-PAGE鉴定蛋白质提取质量第44页
        2.2 蛋白数量第44-45页
        2.3 GO功能分析及富集结果第45-47页
        2.4 COG功能分类结果第47-62页
        2.5 KEGG通路富集分析结果第62-67页
        2.6 Western blot和qRT-PCR检测结果第67-68页
    3 讨论第68-75页
        3.1 代谢相关蛋白第69-74页
            3.1.1 能量代谢第69-73页
                3.1.1.1 Al对光合作用的影响第69-72页
                3.1.1.2 氮代谢第72-73页
            3.1.2 碳水化合物代谢第73页
            3.1.3 氨基酸代谢第73-74页
                3.1.3.1 丙氨酸,天冬氨酸和谷氨酸代谢第73页
                3.1.3.2 谷胱甘肽代谢第73-74页
        3.2 抗氧化酶相关蛋白第74-75页
论文小结第75-76页
附录A 缩略语( Abbreviations)第76-78页
附录B Western-blot实验需要的试剂制备第78-80页
参考文献第80-89页
在读期间发表的论文第89-90页
致谢第90页

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