| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 第一章 引言 | 第15-31页 |
| 1.1 口蹄疫与口蹄疫病毒概述 | 第15-16页 |
| 1.2 病毒样颗粒研究进展 | 第16-24页 |
| 1.2.1 研究历史及现状 | 第17-19页 |
| 1.2.2 结构多样性 | 第19页 |
| 1.2.3 主要表达系统 | 第19-21页 |
| 1.2.4 在疫苗、免疫学检测及基础研究中的应用 | 第21-23页 |
| 1.2.5 面临的问题与挑战 | 第23-24页 |
| 1.3 DC-SIGN介导的树突细胞靶向系统 | 第24-27页 |
| 1.3.1 DC及DC-SIGN | 第24-25页 |
| 1.3.2 DC-SIGN配体 | 第25-26页 |
| 1.3.3 在疫苗研制中应用 | 第26-27页 |
| 1.4 口蹄疫基因工程疫苗研究进展 | 第27-30页 |
| 1.4.1 合成肽疫苗 | 第27页 |
| 1.4.2 亚单位疫苗 | 第27-28页 |
| 1.4.3 多表位疫苗 | 第28页 |
| 1.4.4 病毒样颗粒疫苗 | 第28-29页 |
| 1.4.5 病毒活载体疫苗 | 第29-30页 |
| 1.4.6 反向遗传疫苗 | 第30页 |
| 1.4.7 核酸疫苗 | 第30页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第30-31页 |
| 第二章 FMDV嵌合病毒样颗粒的表达及组装研究 | 第31-47页 |
| 2.1 材料 | 第31-32页 |
| 2.1.1 FMDV参考毒株、质粒及宿主菌株 | 第31页 |
| 2.1.2 限制性内切酶及其它试剂 | 第31-32页 |
| 2.1.3 主要耗材和仪器 | 第32页 |
| 2.2 方法 | 第32-39页 |
| 2.2.1 嵌合基因的设计、优化及合成 | 第32页 |
| 2.2.2 重组杆状病毒转移载体的构建 | 第32-35页 |
| 2.2.3 重组杆状病毒质粒的构建 | 第35-36页 |
| 2.2.4 Sf9细胞的复苏与培养 | 第36页 |
| 2.2.5 重组杆状病毒的获得 | 第36-37页 |
| 2.2.6 重组蛋白的间接免疫荧光检测 | 第37-38页 |
| 2.2.7 重组蛋白的WesternBlot检测 | 第38页 |
| 2.2.8 蔗糖密度梯度离心纯化 | 第38页 |
| 2.2.9 电镜观察 | 第38-39页 |
| 2.3 结果 | 第39-45页 |
| 2.3.1 FMDV嵌合衣壳蛋白基因P12A(O-VP1)和蛋白酶基因3C的优化及序列分析 | 第39-41页 |
| 2.3.2 重组转移质粒pFBDual-P12A3C(O-VP1)鉴定 | 第41页 |
| 2.3.3 重组杆状病毒质粒rBacmid-P12A3C(O-VP1)鉴定 | 第41页 |
| 2.3.4 重组杆状病毒rBac-P12A3C(O-VP1)的获得 | 第41页 |
| 2.3.5 重组杆状病毒rBac-P12A3C(O-VP1)的鉴定 | 第41-43页 |
| 2.3.6 表达产物间接免疫荧光分析 | 第43-44页 |
| 2.3.7 表达产物Westernblot检测 | 第44页 |
| 2.3.8 VLPs电镜观察 | 第44-45页 |
| 2.4 讨论 | 第45-47页 |
| 第三章 FMDV嵌合病毒样颗粒免疫保护效果研究 | 第47-56页 |
| 3.1 材料 | 第47-48页 |
| 3.1.1 试验动物 | 第47页 |
| 3.1.2 细胞和毒株 | 第47-48页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第48页 |
| 3.2 方法 | 第48-51页 |
| 3.2.1 病毒细胞半数感染量(TCID50)测定 | 第48页 |
| 3.2.2 病毒豚鼠半数感染量(GPID50)测定 | 第48页 |
| 3.2.3 豚鼠免疫方案 | 第48页 |
| 3.2.4 抗FMDV特异性血清抗体检测 | 第48-49页 |
| 3.2.5 微量中和抗体检测 | 第49页 |
| 3.2.6 淋巴细胞增殖试验 | 第49-50页 |
| 3.2.7 细胞因子检测 | 第50-51页 |
| 3.2.8 豚鼠攻毒保护试验 | 第51页 |
| 3.2.9 统计分析 | 第51页 |
| 3.3 结果 | 第51-54页 |
| 3.3.1 细胞毒TCID50和豚鼠毒GPID50测定 | 第51页 |
| 3.3.2 豚鼠抗FMDV特异性血清IgG抗体水平 | 第51页 |
| 3.3.3 豚鼠抗FMDV特异性中和抗体水平 | 第51-52页 |
| 3.3.4 细胞因子水平 | 第52-53页 |
| 3.3.5 淋巴细胞特异性增殖情况 | 第53-54页 |
| 3.3.6 豚鼠攻毒保护结果 | 第54页 |
| 3.4 讨论 | 第54-56页 |
| 第四章 FMDVDC靶向性重组融合蛋白的构建及免疫效果研究 | 第56-71页 |
| 4.1 材料 | 第57-58页 |
| 4.1.1 FMDV参考毒株、质粒及宿主菌株 | 第57页 |
| 4.1.2 限制性内切酶及其它试剂 | 第57页 |
| 4.1.3 主要耗材和仪器 | 第57-58页 |
| 4.1.4 试验动物 | 第58页 |
| 4.2 方法 | 第58-64页 |
| 4.2.1 病毒RNA的提取 | 第58页 |
| 4.2.2 VP基因扩增及测序 | 第58-59页 |
| 4.2.3 重组融合蛋白基因VP1、VP1-gp120和VP1-E2的设计及合成 | 第59页 |
| 4.2.4 重组杆状病毒转移载体的构建 | 第59-60页 |
| 4.2.5 重组杆状病毒质粒的构建 | 第60-61页 |
| 4.2.6 Sf9细胞的复苏与培养 | 第61页 |
| 4.2.7 重组杆状病毒rBac-VP1、rBac-VP1-gp120和rBac-VP1-E2的获得 | 第61-62页 |
| 4.2.8 重组蛋白VP1、VP1-gp120和VP1-E2的表达纯化 | 第62页 |
| 4.2.9 重组蛋白VP1、VP1-gp120和VP1-E2的WesternBlot检测 | 第62-63页 |
| 4.2.10 豚鼠免疫方案 | 第63页 |
| 4.2.11 抗FMDV特异性血清抗体检测 | 第63页 |
| 4.2.12 淋巴细胞增殖试验 | 第63页 |
| 4.2.13 细胞因子检测 | 第63-64页 |
| 4.2.14 统计分析 | 第64页 |
| 4.3 结果 | 第64-69页 |
| 4.3.1 FMDV重组融合蛋白基因优化合成 | 第64-66页 |
| 4.3.2 重组转移载体和重组杆粒的鉴定 | 第66页 |
| 4.3.3 重组蛋白的表达与鉴定 | 第66-67页 |
| 4.3.4 豚鼠抗FMDV特异性血清IgG抗体水平 | 第67-68页 |
| 4.3.5 细胞免疫应答水平检测 | 第68-69页 |
| 4.4 讨论 | 第69-71页 |
| 第五章 全文结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 作者简历 | 第83-84页 |
