| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 缩略语对照表 | 第8-12页 |
| 1 研究背景与意义 | 第12-20页 |
| 1.1 止血材料的研究进展 | 第12-15页 |
| 1.1.1 传统棉制品材料 | 第12页 |
| 1.1.2 纤维蛋白类止血材料 | 第12-13页 |
| 1.1.3 高分子多糖类止血材料 | 第13-14页 |
| 1.1.4 止血敷料 | 第14页 |
| 1.1.5 化学止血材料 | 第14-15页 |
| 1.2 影响RADA-16自组装能力的因素 | 第15-17页 |
| 1.2.1 多肽浓度 | 第15页 |
| 1.2.2 pH值 | 第15页 |
| 1.2.3 温度 | 第15-16页 |
| 1.2.4 机械力 | 第16页 |
| 1.2.5 RADA-16连接不同的结构基序 | 第16-17页 |
| 1.3 RADA-16的止血性能 | 第17-18页 |
| 1.4 本研究的目的及意义 | 第18-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-38页 |
| 2.1 菌种、质粒及实验动物 | 第20页 |
| 2.2 仪器与器材 | 第20-21页 |
| 2.2.1 仪器 | 第20页 |
| 2.2.2 器材 | 第20-21页 |
| 2.3 试剂与配置 | 第21-25页 |
| 2.3.1 试剂 | 第21页 |
| 2.3.2 试剂配制 | 第21-25页 |
| 2.4 实验方法 | 第25-30页 |
| 2.4.1 hELPs-RADA-16融合蛋白原核表达载体的构建与表达 | 第25-27页 |
| 2.4.3 融合蛋白表达、可溶性分析及检测 | 第27-30页 |
| 2.5 蛋白纯化 | 第30-38页 |
| 2.5.1 ITC纯化 | 第30-31页 |
| 2.5.2 镍填料纯化蛋白 | 第31页 |
| 2.5.3 相变温度测定 | 第31-32页 |
| 2.5.4 盐浓度对蛋白相变温度的影响 | 第32页 |
| 2.5.5 蛋白制备 | 第32-34页 |
| 2.5.6 细胞实验 | 第34-38页 |
| 3 实验结果与讨论 | 第38-60页 |
| 3.1 hELPs-RADA-16融合蛋白原核表达载体的构建 | 第38-43页 |
| 3.1.1 pMD19-T-hELP36R 的构建 | 第38页 |
| 3.1.2 pMD19-T-hELP60R的构建 | 第38-39页 |
| 3.1.3 pMD19-T-hELP96R的构建 | 第39-40页 |
| 3.1.4 pET28a-hELP36R、pET28a-hELP60R以及pET28a-hELP96R的构建 | 第40-41页 |
| 3.1.5 融合蛋白表达 | 第41页 |
| 3.1.6 Western-Blot检测融合蛋白 | 第41-42页 |
| 3.1.7 可溶性分析 | 第42-43页 |
| 3.2 蛋白纯化 | 第43-50页 |
| 3.2.1 ITC纯化 | 第43-46页 |
| 3.2.2 镍填料纯化 | 第46-50页 |
| 3.3 融合蛋白相变温度 | 第50-51页 |
| 3.4 盐浓度对融合蛋白相变温度的影响 | 第51-52页 |
| 3.5 蛋白冻干膜片的制备与形貌观察 | 第52-53页 |
| 3.5.1 蛋白冻干膜片大体观察 | 第52-53页 |
| 3.5.2 扫描电镜形貌观察 | 第53页 |
| 3.6 细胞实验 | 第53-57页 |
| 3.6.1 细胞贴壁实验 | 第53-55页 |
| 3.6.2 细胞迁移实验 | 第55-56页 |
| 3.6.3 细胞增殖实验 | 第56-57页 |
| 3.7 小鼠肝脏止血实验 | 第57-60页 |
| 4 小结 | 第60-62页 |
| 4.1 克隆载体构建 | 第60页 |
| 4.2 表达载体构建 | 第60页 |
| 4.3 融合蛋白检测及可溶性分析 | 第60页 |
| 4.4 融合蛋白收集及纯化 | 第60-61页 |
| 4.5 相变温度 | 第61页 |
| 4.6 细胞实验 | 第61页 |
| 4.7 小鼠肝脏止血实验 | 第61页 |
| 4.8 实验中存在的不足 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62-64页 |
| 科研成果 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-70页 |
