| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 主要符号对照表 | 第13-14页 |
| 第1章 引言 | 第14-30页 |
| 1.1 血管生成概念 | 第15-16页 |
| 1.1.1 血管生成分类 | 第15页 |
| 1.1.2 血管生成方式 | 第15-16页 |
| 1.2 肿瘤血管生成调节机制 | 第16-21页 |
| 1.2.1 血管生成细胞因子 | 第16-19页 |
| 1.2.2 NF-κB 信号通路与血管生成的关系 | 第19页 |
| 1.2.3 PI3K/AKT 信号通路的调控与肿瘤血管生成 | 第19-20页 |
| 1.2.4 Notch 信号通路与血管生成 | 第20-21页 |
| 1.3 肿瘤血管生成抑制策略和抑制剂 | 第21-25页 |
| 1.3.1 肿瘤血管生长因子抑制剂 | 第21-22页 |
| 1.3.1.1 抗体类药物 | 第21-22页 |
| 1.3.1.2 激酶抑制剂 | 第22页 |
| 1.3.2 血管内皮细胞的血管生成抑制剂 | 第22-23页 |
| 1.3.3 基质金属蛋白酶(metallo proteinases, MMPs)抑制剂 | 第23页 |
| 1.3.4 具有抑制肿瘤血管生成作用的其他药物 | 第23-24页 |
| 1.3.5 基因治疗与抗肿瘤血管生成 | 第24-25页 |
| 1.4 Kallistatin 活性研究 | 第25-28页 |
| 1.5 问题和展望 | 第28-30页 |
| 第2章 rhKal 对 VEGF 诱导的 HUVEC 细胞生物活性影响及分子机制研究 | 第30-61页 |
| 2.1 前言 | 第30-31页 |
| 2.2 实验材料及仪器 | 第31-35页 |
| 2.2.1 药品及耗材 | 第31-32页 |
| 2.2.2 培养基及常用溶液 | 第32-34页 |
| 2.2.3 仪器 | 第34-35页 |
| 2.3 实验方法 | 第35-43页 |
| 2.3.1 rhKal 蛋白的表达和纯化 | 第35页 |
| 2.3.2 ELISA 定量检测目的蛋白 rhKal 含量 | 第35-36页 |
| 2.3.3 rhKal 蛋白中脂多糖（LPS）检测 | 第36-37页 |
| 2.3.4 MTT 法测定 rhKal 对 HUVEC 细胞活力的影响 | 第37页 |
| 2.3.5 rhKal 对 HUVEC 细胞增殖的影响 | 第37-38页 |
| 2.3.6 rhKal 对 HUVEC 细胞凋亡的影响 | 第38页 |
| 2.3.7 rhKal 对 HUVEC 迁移和侵袭的影响 | 第38-39页 |
| 2.3.7.1 划痕实验 | 第38页 |
| 2.3.7.2 侵袭实验 | 第38-39页 |
| 2.3.8 rhKal 对 HUVEC 小管形成的影响 | 第39页 |
| 2.3.9 rhKal 体内抗血管生成 | 第39-41页 |
| 2.3.9.1 Matrigel 基质胶实验 | 第39页 |
| 2.3.9.2 组织切片和 Masson 染色 | 第39-41页 |
| 2.3.10 Western blot 法检测 rhKal 对 VEGF 信号通路的影响 | 第41-43页 |
| 2.3.10.1 蛋白质样品的制备 | 第41-42页 |
| 2.3.10.2 BCA 法总蛋白定量检测 | 第42页 |
| 2.3.10.3 Western blot 检测 | 第42-43页 |
| 2.3.11 统计分析 | 第43页 |
| 2.4 结果与分析 | 第43-57页 |
| 2.4.1 rhKal 蛋白的纯化和鉴定 | 第43-44页 |
| 2.4.2 ELISA 法检测 rhKal 蛋白含量 | 第44页 |
| 2.4.3 rhKal 蛋白中脂多糖（LPS）检测 | 第44-45页 |
| 2.4.4 rhKal 对 HUVEC 细胞活力的影响 | 第45-46页 |
| 2.4.5 rhKal 对 HUVEC 细胞增殖的影响 | 第46-47页 |
| 2.4.6 rhKal 对 HUVEC 细胞凋亡的影响 | 第47-48页 |
| 2.4.7 rhKal 对 VEGF165 诱导的 HUVEC 细胞二维水平迁移的影响 | 第48-50页 |
| 2.4.8 rhKal 对 VEGF165 诱导的 HUVEC 细胞侵袭的影响 | 第50-51页 |
| 2.4.9 rhKal 对 VEGF165 诱导的小管形成的影响 | 第51-53页 |
| 2.4.10 rhKal 体内对血管生成的影响 | 第53-54页 |
| 2.4.11 rhKal 对 VEGFR-2 及下游信号通路的影响 | 第54-57页 |
| 2.5 小结 | 第57-61页 |
| 第3章 rhKal 对肿瘤血管生成影响及分子机制研究 | 第61-85页 |
| 3.1 前言 | 第61-63页 |
| 3.2 实验材料及仪器 | 第63-67页 |
| 3.2.1 药品及耗材 | 第63-64页 |
| 3.2.2 培养基及常用溶液 | 第64-66页 |
| 3.2.3 仪器 | 第66-67页 |
| 3.3 实验方法 | 第67-71页 |
| 3.3.1 MTT 法测定 rhKal 对乳腺癌 MCF-7 细胞活力的影响 | 第67页 |
| 3.3.2 rhKal 对 MCF-7 细胞刺激下 HUVEC 细胞侵袭的影响 | 第67-68页 |
| 3.3.3 rhKal 对 MCF-7 细胞刺激下 HUVEC 细胞小管形成的影响 | 第68页 |
| 3.3.4 rhKal 对 MCF-7 细胞刺激下体内鸡胚尿囊膜血管生成的影响 | 第68页 |
| 3.3.5 rhKal 对 MCF-7 细胞刺激下大鼠动脉环出芽的影响 | 第68-69页 |
| 3.3.6 rhKal 对 NF-κB 报告基因表达的影响 | 第69页 |
| 3.3.6.1 载体转染 | 第69页 |
| 3.3.6.2 报告基因检测 | 第69页 |
| 3.3.7 Western blot 法检测 rhKal 对 NF-κB 信号通路的影响 | 第69-71页 |
| 3.3.7.1 核蛋白和胞浆蛋白提取 | 第69-70页 |
| 3.3.7.2 细胞总蛋白的提取 | 第70页 |
| 3.3.7.3 Western blot | 第70-71页 |
| 3.3.8 统计分析 | 第71页 |
| 3.4 结果与分析 | 第71-82页 |
| 3.4.1 rhKal 对乳腺癌 MCF-7 细胞活力的影响 | 第71-72页 |
| 3.4.2 rhKal 对乳腺癌 MCF-7 细胞诱导的 HUVEC 细胞侵袭的影响 | 第72-73页 |
| 3.4.3 rhKal 对乳腺癌 MCF-7 细胞诱导的 HUVEC 细胞小管形成的影响 | 第73-75页 |
| 3.4.4 rhKal 对 MCF-7 细胞诱导的大鼠动脉环出芽的影响 | 第75-76页 |
| 3.4.5 rhKal 对 MCF-7 细胞诱导的鸡胚尿囊膜血管生成的影响 | 第76-77页 |
| 3.4.6 rhKal 对 NF-κB 信号通路的影响 | 第77-80页 |
| 3.4.7 rhKal 对 NF-κB 核转位的影响 | 第80-81页 |
| 3.4.8 rhKal 对 NF-κB 荧光素酶报告基因的影响 | 第81页 |
| 3.4.9 rhKal 对 NF-κB 信号通路下游相关目的蛋白表达的影响 | 第81-82页 |
| 3.5 小结 | 第82-85页 |
| 第4章 外源性 P65 基因参与 rhKal 抑制肿瘤血管生成活性研究 | 第85-105页 |
| 4.1 前言 | 第85-86页 |
| 4.2 实验材料及仪器 | 第86-90页 |
| 4.2.1 药品及耗材 | 第86-87页 |
| 4.2.2 培养基及常用溶液 | 第87-89页 |
| 4.2.3 仪器 | 第89-90页 |
| 4.3 实验方法 | 第90-96页 |
| 4.3.1 细胞总 RNA 的提取和 cDNA 的合成 | 第90-91页 |
| 4.3.2 目的基因的获取 | 第91-92页 |
| 4.3.3 碱裂解法提取质粒 | 第92页 |
| 4.3.4 真核表达质粒的构建 | 第92-94页 |
| 4.3.5 感受态细胞的制备 | 第94页 |
| 4.3.6 转化 | 第94-95页 |
| 4.3.7 阳性克隆的 PCR 鉴定 | 第95页 |
| 4.3.8 真核表达质粒 P65cDNA 细胞转染 | 第95页 |
| 4.3.9 Transwell 侵袭小室实验 | 第95页 |
| 4.3.10 Western-blotting 实验 | 第95-96页 |
| 4.3.11 统计学处理 | 第96页 |
| 4.4 结果与分析 | 第96-102页 |
| 4.4.1 p65 目的基因的获取 | 第96页 |
| 4.4.2 表达载体构建及验证 | 第96-97页 |
| 4.4.3 真核表达质粒 p65cDNA 瞬时转染细胞 | 第97-98页 |
| 4.4.4 过表达 p65 基因对 rhKal 抑制 HUVEC 细胞侵袭作用的影响 | 第98-99页 |
| 4.4.5 过表达 p65 基因对 rhKal 抑制乳腺癌 MCF-7 细胞诱导 HUVEC 细胞侵袭作用的影响 | 第99-100页 |
| 4.4.6 过表达 p65 基因对 rhKal 对血管生成相关基因抑制作用的影响 | 第100-102页 |
| 4.5 小结 | 第102-105页 |
| 第5章 总结 | 第105-107页 |
| 1、论文主要成绩和下步计划 | 第105-106页 |
| 2、前景与展望 | 第106-107页 |
| 创新点 | 第107-109页 |
| 参考文献 | 第109-123页 |
| 致谢 | 第123-125页 |
| 在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第125页 |
