胱抑素C单克隆抗体的制备及荧光免疫层析法的建立
| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 符号与缩略语 | 第11-12页 |
| 常用单位 | 第12-13页 |
| 1 引言 | 第13-18页 |
| 1.1 研究背景 | 第13-14页 |
| 1.2 胱抑素C结构及生理功能 | 第14页 |
| 1.3 胱抑素C与疾病的关系 | 第14-16页 |
| 1.3.1 胱抑素C在评价肾损害的应用 | 第14-15页 |
| 1.3.2 胱抑素C与肿瘤的关系 | 第15-16页 |
| 1.3.3 胱抑素C与心脑血管病 | 第16页 |
| 1.4 胱抑素C检测技术 | 第16-18页 |
| 1.5 胱抑素C荧光层析检测试剂盒研发意义 | 第18页 |
| 2 实验材料和实验方法 | 第18-48页 |
| 2.1 材料 | 第18-28页 |
| 2.1.1 胱抑素C原核表达生物材料 | 第18页 |
| 2.1.2 胱抑素C血清 | 第18-19页 |
| 2.1.3 实验动物与细胞株 | 第19页 |
| 2.1.4 主要生化试剂 | 第19-20页 |
| 2.1.5 主要仪器设备 | 第20-21页 |
| 2.1.6 主要试剂配制 | 第21-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-48页 |
| 2.2.1 胱抑素C重组质粒构建 | 第28-31页 |
| 2.2.2 重组质粒验证 | 第31页 |
| 2.2.3 胱抑素C诱导表达 | 第31-36页 |
| 2.2.4 胱抑素C抗体制备 | 第36-40页 |
| 2.2.5 胱抑素C荧光层析检测方法的建立 | 第40-48页 |
| 3 实验结果 | 第48-65页 |
| 3.1 重组胱抑素C质粒构建 | 第48-50页 |
| 3.1.1 胱抑素C基因序列合成 | 第48页 |
| 3.1.2 PCR扩增胱抑素C基因 | 第48页 |
| 3.1.3 重组质粒鉴定 | 第48-50页 |
| 3.2 胱抑素C诱导表达及鉴定 | 第50-53页 |
| 3.2.1 胱抑素C初步诱导SDS-PAGE检测 | 第50页 |
| 3.2.2 胱抑素C诱导表达条件优化 | 第50-52页 |
| 3.2.3 胱抑素C重组蛋白纯化 | 第52页 |
| 3.2.4 胱抑素C抗原活性鉴定 | 第52-53页 |
| 3.3 胱抑素C单克隆抗体的制备 | 第53-56页 |
| 3.3.1 ELISA间接检测方法建立 | 第53页 |
| 3.3.2 血清抗体效价检测 | 第53-54页 |
| 3.3.3 筛选阳性单克隆细胞 | 第54页 |
| 3.3.4 细胞株冻存稳定性测定结果 | 第54-55页 |
| 3.3.5 单克隆抗体的鉴定 | 第55-56页 |
| 3.4 胱抑素C荧光层析方法的建立 | 第56-62页 |
| 3.4.1 室内参考品稳定性检测 | 第56-57页 |
| 3.4.2 单克隆抗体配对筛 | 第57-58页 |
| 3.4.3 胱抑素C荧光层析试纸条制备工艺优化 | 第58-62页 |
| 3.5 免疫荧光层析定量方法的性能评价 | 第62-65页 |
| 3.5.1 线性范围及最低检测限 | 第62页 |
| 3.5.2 精密度 | 第62页 |
| 3.5.3 准确度 | 第62-63页 |
| 3.5.4 特异性 | 第63页 |
| 3.5.5 稳定性实验 | 第63页 |
| 3.5.6 方法学比对 | 第63-65页 |
| 4 讨论 | 第65-67页 |
| 4.1 胱抑素C表达系统的选择 | 第65页 |
| 4.2 胱抑素C蛋白的纯化 | 第65-66页 |
| 4.3 胱抑素C荧光层析试纸条制备工艺优化 | 第66页 |
| 4.4 展望 | 第66-67页 |
| 5 结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-74页 |
| 个人简历 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
