摘要 | 第5-7页 |
abstract | 第7-8页 |
第一章 文献综述 | 第11-18页 |
1.1 奶山羊乳腺调控机理的研究意义 | 第11页 |
1.2 奶山羊乳腺发育的研究进展 | 第11-12页 |
1.2.1 乳腺的发育及泌乳机理 | 第11-12页 |
1.2.2 乳腺上皮细胞的简介 | 第12页 |
1.3 miRNA与乳腺发育 | 第12-15页 |
1.3.1 miRNA的作用机制 | 第12-13页 |
1.3.2 miRNA靶基因的鉴定方法 | 第13-14页 |
1.3.3 miRNA对乳腺发育的调控 | 第14页 |
1.3.4 miRNA对泌乳功能的调控作用 | 第14-15页 |
1.4 RNA干扰技术的研究进展 | 第15页 |
1.5 OGR1基因的研究进展 | 第15-16页 |
1.6 本研究的目的和意义 | 第16页 |
1.7 研究思路及技术路线 | 第16-18页 |
试验研究 | 第18-40页 |
第二章 miR-3880对OGR1基因调控作用的研究 | 第18-29页 |
2.1 引言 | 第18页 |
2.2 材料与方法 | 第18-24页 |
2.2.1 样品采集 | 第18页 |
2.2.2 主要仪器设备 | 第18页 |
2.2.3 主要试验试剂 | 第18页 |
2.2.4 miR-3880靶基因的预测 | 第18页 |
2.2.5 双荧光素酶报告载体和突变载体的构建 | 第18-21页 |
2.2.6 化学合成miRNA模拟物 | 第21页 |
2.2.7 293 T细胞共转染及荧光素酶活性检测 | 第21页 |
2.2.8 奶山羊乳腺上皮细胞转染 | 第21-22页 |
2.2.9 Realtime-qPCR | 第22-23页 |
2.2.10 WesternBlot检测 | 第23-24页 |
2.2.11 数据统计分析 | 第24页 |
2.3 结果分析 | 第24-27页 |
2.3.1 miR-3880靶基因的生物信息预测 | 第24页 |
2.3.2 OGR1-3′UTR区的克隆 | 第24-25页 |
2.3.3 双荧光素酶报告载体构建 | 第25页 |
2.3.4 突变双荧光素酶报告载体的构建 | 第25-26页 |
2.3.5 荧光素酶活性的检测分析 | 第26页 |
2.3.6 miR-3880对OGR1基因在mRNA水平的影响 | 第26-27页 |
2.3.7 miR-3880对OGR1基因在蛋白水平的影响 | 第27页 |
2.4 讨论 | 第27-28页 |
2.5 小结 | 第28-29页 |
第三章 OGR1对奶山羊乳腺上皮细胞调控作用的研究 | 第29-40页 |
3.1 引言 | 第29页 |
3.2 材料与方法 | 第29-30页 |
3.2.1 样品的采集 | 第29页 |
3.2.2 主要仪器设备 | 第29页 |
3.2.3 主要试验试剂 | 第29页 |
3.2.4 流式细胞术检测细胞凋亡 | 第29-30页 |
3.2.5 CCK8法检测细胞增殖 | 第30页 |
3.2.6 ELISA试剂盒检测细胞中β-酪蛋白的合成 | 第30页 |
3.2.7 甘油三酯酶法检测试剂盒检测细胞中甘油三酯的合成 | 第30页 |
3.2.8 数据统计分析 | 第30页 |
3.3 结果分析 | 第30-36页 |
3.3.1 OGR1干扰效率检测 | 第30-31页 |
3.3.2 OGR1干扰后对乳腺上皮细胞生长发育的影响 | 第31-34页 |
3.3.3 OGR1干扰后对乳腺上皮细胞泌乳功能的影响 | 第34-36页 |
3.4 讨论 | 第36-39页 |
3.4.1 OGR1对奶山羊乳腺上皮细胞增殖和凋亡的影响 | 第36-38页 |
3.4.2 OGR1对奶山羊乳腺上皮细胞泌乳成分的调节 | 第38-39页 |
3.5 小结 | 第39-40页 |
研究结论 | 第40-41页 |
创新点 | 第41-42页 |
进一步研究的问题 | 第42-43页 |
参考文献 | 第43-50页 |
附录 | 第50-56页 |
致谢 | 第56-57页 |
作者简介 | 第57页 |