| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-24页 |
| 1.1 引言 | 第10页 |
| 1.2 乳酸菌酸耐受的研究进展 | 第10-12页 |
| 1.3 Nisin的研究进展 | 第12-13页 |
| 1.4 细菌sRNA的研究进展 | 第13-22页 |
| 1.4.1 细菌sRNA的特征 | 第13-14页 |
| 1.4.2 细菌sRNA靶标基因的预测与鉴定 | 第14-16页 |
| 1.4.3 细菌sRNA与其靶标的相互作用 | 第16-19页 |
| 1.4.4 细菌sRNA的功能 | 第19-20页 |
| 1.4.5 与代谢工程中的应用 | 第20-22页 |
| 1.5 本文的主要研究内容和意义 | 第22-24页 |
| 第2章 3个耐酸sRNA的靶基因预测与鉴定 | 第24-40页 |
| 2.1 引言 | 第24页 |
| 2.2 实验材料 | 第24-28页 |
| 2.2.1 菌种及质粒 | 第24页 |
| 2.2.2 实验所用培养基 | 第24-25页 |
| 2.2.3 实验药品和试剂 | 第25-26页 |
| 2.2.4 实验仪器和设备 | 第26-28页 |
| 2.3 实验方法 | 第28-34页 |
| 2.3.1 总RNA的提取 | 第28页 |
| 2.3.2 变性PAGE胶的配制 | 第28页 |
| 2.3.3 RNA样品的处理 | 第28页 |
| 2.3.4 RNA垂直电泳 | 第28-29页 |
| 2.3.5 RNA样品转膜 | 第29页 |
| 2.3.6 RNA与探针的杂交 | 第29页 |
| 2.3.7 杂交尼龙膜的洗涤 | 第29页 |
| 2.3.8 洗脱、封闭和显影 | 第29-30页 |
| 2.3.9 生物素标记探针的合成 | 第30页 |
| 2.3.10 基于在线软件的靶标预测 | 第30-31页 |
| 2.3.11 sRNA靶标验证菌株的构建 | 第31-33页 |
| 2.3.12 sRNA靶标验证菌株的荧光检测 | 第33-34页 |
| 2.4 实验结果 | 第34-38页 |
| 2.4.1 候选sRNA的northernblot验证 | 第34页 |
| 2.4.2 sRNA靶标验证荧光强度变化 | 第34-36页 |
| 2.4.3 sRNA与靶标基因之间的相互作用 | 第36-38页 |
| 2.5 小结 | 第38-40页 |
| 第3章 sRNA的过表达菌株构建与表型分析 | 第40-56页 |
| 3.1 引言 | 第40页 |
| 3.2 实验材料 | 第40-42页 |
| 3.2.1 菌种及质粒 | 第40页 |
| 3.2.2 实验所用培养基 | 第40-41页 |
| 3.2.3 实验药品和试剂 | 第41-42页 |
| 3.2.4 实验仪器和设备 | 第42页 |
| 3.3 实验方法 | 第42-48页 |
| 3.3.1 乳酸乳球菌F44基因组的提取 | 第42-43页 |
| 3.3.2 引物设计与验证 | 第43页 |
| 3.3.3 质粒的提取 | 第43-44页 |
| 3.3.4 目的基因的扩增和回收 | 第44页 |
| 3.3.5 目的片段与载体的酶切回收及连接 | 第44-45页 |
| 3.3.6 大肠杆菌TG1感受态细胞的制备 | 第45页 |
| 3.3.7 感受态细胞化学法转化 | 第45-46页 |
| 3.3.8 转化子的筛选验证 | 第46页 |
| 3.3.9 乳酸乳球菌F44感受态细胞的制备 | 第46页 |
| 3.3.10 电击转化感受态细胞及转化子的筛选与验证 | 第46-47页 |
| 3.3.11 酸耐受性检测 | 第47-48页 |
| 3.3.12 生长曲线及发酵液pH的测定 | 第48页 |
| 3.3.13 nisin效价的检测 | 第48页 |
| 3.4 实验结果 | 第48-54页 |
| 3.4.1 RNA-seq对候选sRNA挖掘及5个候选sRNA的qRT-PCR验证.. | 第48-50页 |
| 3.4.2 单个sRNA过表达对乳酸乳球菌酸耐受的影响 | 第50-51页 |
| 3.4.3 单个sRNA过表达对乳酸乳球菌菌体量的影响 | 第51-52页 |
| 3.4.4 单个sRNA过表达菌株对发酵液pH的影响 | 第52-53页 |
| 3.4.5 单个sRNA过表达菌株nisin产量分析 | 第53-54页 |
| 3.5 小结 | 第54-56页 |
| 第4章 基于sRNA高表达的nisin高产菌株构建 | 第56-67页 |
| 4.1 引言 | 第56页 |
| 4.2 实验材料 | 第56页 |
| 4.2.1 菌种及质粒 | 第56页 |
| 4.2.2 实验所用培养基 | 第56页 |
| 4.2.3 实验药品和试剂 | 第56页 |
| 4.2.4 实验仪器和设备 | 第56页 |
| 4.3 实验方法 | 第56-60页 |
| 4.3.1 引物设计与验证 | 第56-58页 |
| 4.3.2 质粒的提取 | 第58页 |
| 4.3.3 目的片段的扩增及回收 | 第58页 |
| 4.3.5 目的片段与载体的酶切回收及连接 | 第58页 |
| 4.3.6 化学转化大肠杆菌及筛选 | 第58页 |
| 4.3.7 乳酸乳球菌菌株xl1感受态细胞制备 | 第58-59页 |
| 4.3.8 电击转化感受态细胞及转化子的筛选与验证 | 第59页 |
| 4.3.9 酸耐受性检测 | 第59页 |
| 4.3.10 生长曲线及发酵液pH的测定 | 第59页 |
| 4.3.11 nisin效价的检测 | 第59-60页 |
| 4.4 实验结果 | 第60-65页 |
| 4.4.1 串联sRNA共表达菌株酸耐受性分析 | 第60-61页 |
| 4.4.2 串联sRNA共表达菌株发酵情况分析 | 第61-63页 |
| 4.4.3 sRNA高表达对高产nisin菌株xl1发酵情况影响 | 第63-65页 |
| 4.5 小结 | 第65-67页 |
| 第5章 结论与展望 | 第67-69页 |
| 5.1 结论 | 第67-68页 |
| 5.2 展望 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-79页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
