| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第1章 前言 | 第10-13页 |
| 第2章 材料 | 第13-18页 |
| 2.1 实验主要试剂 | 第13-14页 |
| 2.2 实验主要菌株和载体 | 第14页 |
| 2.3 实验主要仪器 | 第14-15页 |
| 2.4 主要溶液的配置 | 第15-18页 |
| 2.4.1 10%SDS溶液 | 第15-16页 |
| 2.4.2 5×TBE电泳缓冲液 | 第16页 |
| 2.4.3 1％电泳凝胶 | 第16页 |
| 2.4.4 LB液体培养基 | 第16页 |
| 2.4.5 LB固体培养基 | 第16页 |
| 2.4.6 RIPABuffer缓冲液 | 第16-17页 |
| 2.4.7 10×TBS溶液 | 第17-18页 |
| 第3章 方法 | 第18-28页 |
| 3.1 构建荧光素酶报告载体(SPAG16L/pGL3) | 第18-21页 |
| 3.1.1 SPAG16L引物设计 | 第18页 |
| 3.1.2 聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction,PCR) | 第18页 |
| 3.1.3 PCR产物凝胶电泳鉴定 | 第18-19页 |
| 3.1.4 PCR产物回收纯化 | 第19页 |
| 3.1.5 TA克隆及其连接产物的转化 | 第19-20页 |
| 3.1.6 阳性菌落质粒的小量制备 | 第20页 |
| 3.1.7 SPAG16L/pClone007重组质粒酶切鉴定 | 第20-21页 |
| 3.1.8 目的片段DNA测序 | 第21页 |
| 3.2 重组质粒SPAG16L/pGL3的构建与鉴定 | 第21-23页 |
| 3.2.1 SPAG16L/pClone007克隆质粒与载体的酶切 | 第21页 |
| 3.2.2 目的片段SPAG16L与载体的回收纯化 | 第21-22页 |
| 3.2.3 目的片段SPAG16L与载体的连接转化 | 第22页 |
| 3.2.4 SPAG16L重组表达质粒SPAG16L/pGL3的双酶切鉴定 | 第22-23页 |
| 3.2.5 DNA测序验证重组质粒是否成功 | 第23页 |
| 3.3 构建S-SOX5表达载体(S-SOX5/pcDNA3) | 第23页 |
| 3.4 S-SOX5/pcDNA3在BEAS-2B细胞的表达 | 第23-24页 |
| 3.4.1 重组质粒S-SOX5/pcDNA3转染至BEAS-2B细胞 | 第23-24页 |
| 3.4.2 提取BEAS-2B细胞内的总蛋白 | 第24页 |
| 3.4.3 BCA法测量BEAS-2B细胞总蛋白浓度（BCA 蛋白浓度测定试剂盒） | 第24页 |
| 3.5 Westernblot鉴定小鼠睾丸组织或BEAS-2B细胞S-SOX5蛋白表达 | 第24-26页 |
| 3.6 RT-PCR检测BEAS-2B细胞SPAG16LmRNA水平 | 第26页 |
| 3.7 染色体免疫共沉淀(CHIP) | 第26页 |
| 3.8 点突变SPAG16L启动子区域S-SOX5结合位点 | 第26-28页 |
| 第4章 结果 | 第28-34页 |
| 4.1 人SPAG16L基因近端启动子区域含有多个SOX5结合位点 | 第28页 |
| 4.2 人SOX5转录子结构和在BEAS-2B细胞的表达 | 第28-29页 |
| 4.3 S-SOX5激活BEAS-2B细胞中的SPAG16L启动子区域的活性 | 第29-30页 |
| 4.4 外源性S-SOX5对SPAG16LmRNA表达水平的影响 | 第30-31页 |
| 4.5 BEAS-2B细胞中S-SOX5表达减少导致SPAG16L的表达下降 | 第31-32页 |
| 4.6 S-SOX5与SPAG16L的启动子区域结合 | 第32页 |
| 4.7 突变SOX5结合位点后,SPAG16L启动子区域的活性缺失 | 第32-34页 |
| 第5章 讨论 | 第34-36页 |
| 第6章 结论与展望 | 第36-37页 |
| 致谢 | 第37-38页 |
| 参考文献 | 第38-42页 |
| 综述 | 第42-50页 |
| 参考文献 | 第47-50页 |
| 附录1 引物信息 | 第50-51页 |
| 附录2 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第51-52页 |
| 附录3 攻读硕士学位期间从参加的科研项目 | 第52页 |
