| 中文摘要 | 第4-5页 |
| Abstact | 第5-6页 |
| 1. 引言 | 第10-12页 |
| 2. 研究背景 | 第12-43页 |
| 2.1 HIV-1与获得性免疫缺陷病 | 第12-25页 |
| 2.1.1 AIDS流行现状 | 第12-13页 |
| 2.1.2 HIV-1结构和基因 | 第13-16页 |
| 2.1.3 HIV-1的复制周期 | 第16-19页 |
| 2.1.4 HIV-1的传播 | 第19-20页 |
| 2.1.5 HIV-I致病机制 | 第20-22页 |
| 2.1.6 HIV-1病毒的限制因子 | 第22-25页 |
| 2.2 MicroRNA-146a | 第25-31页 |
| 2.2.1 MicroRNA的简介 | 第25页 |
| 2.2.2 MicroRNA的生成过程 | 第25-26页 |
| 2.2.3 MicroRNA的作用机制 | 第26页 |
| 2.2.4 MicroRNA受调控的机制 | 第26-27页 |
| 2.2.5 MiR-146a的发现和靶基因 | 第27-29页 |
| 2.2.6 miR-146a与天然免疫 | 第29-30页 |
| 2.2.7 miR-146a与HIV-1 | 第30-31页 |
| 2.3 HIV-1与细胞因子 | 第31-36页 |
| 2.4 CRISPR/Cas9基因编辑技术 | 第36-43页 |
| 2.4.1 基因编辑技术简介 | 第36-37页 |
| 2.4.2 CRISPR/Cas9技术的前世今生 | 第37-40页 |
| 2.4.3 Ⅱ型CRISPR/Cas9系统作用原理 | 第40-41页 |
| 2.4.4 CRISPR/Cas9编辑在HIV/AIDS治疗中的应用 | 第41-42页 |
| 2.4.5 CRISPR/Cas9编辑miRNA的应用 | 第42-43页 |
| 3. 实验材料和方法 | 第43-66页 |
| 3.1 主要仪器设备 | 第43-44页 |
| 3.2 实验材料 | 第44-49页 |
| 3.2.1 质粒及分子克隆试剂 | 第44-45页 |
| 3.2.2 细胞 | 第45页 |
| 3.2.3 细胞培养试剂 | 第45页 |
| 3.2.4 抗体 | 第45-46页 |
| 3.2.5 逆转录聚合酶链反应和实时定量PCR试剂 | 第46页 |
| 3.2.6 蛋白印迹试剂 | 第46页 |
| 3.2.7 转染试剂 | 第46-47页 |
| 3.2.8 ELISA及CCK8试剂盒 | 第47页 |
| 3.2.9 其他试剂 | 第47页 |
| 3.2.10 培养基的配制及储存 | 第47-49页 |
| 3.3 实验方法 | 第49-66页 |
| 3.3.1 感受态细胞的制备 | 第49-50页 |
| 3.3.2 质粒的构建、鉴定及测序 | 第50-52页 |
| 3.3.3 重组质粒转化 | 第52页 |
| 3.3.4 提取质粒并鉴定 | 第52-53页 |
| 3.3.5 转染 | 第53页 |
| 3.3.6 慢病毒的包装 | 第53-54页 |
| 3.3.7 HIV-1病毒扩增及滴度测定 | 第54页 |
| 3.3.8 慢病毒感染 | 第54-55页 |
| 3.3.9 细胞基因组提取 | 第55-56页 |
| 3.3.10 PCR扩增目的基因靶序列片段 | 第56页 |
| 3.3.11 胶回收PCR片段 | 第56-57页 |
| 3.3.12 T7EN1实验 | 第57页 |
| 3.3.13 T载体克隆 | 第57-58页 |
| 3.3.14 RNA提取 | 第58页 |
| 3.3.15 RNA逆转录 | 第58-59页 |
| 3.3.16 Real-time PCR反应 | 第59-61页 |
| 3.3.17 HIV-1病毒感染MT2细胞 | 第61页 |
| 3.3.18 蛋白印迹检测蛋白 | 第61-63页 |
| 3.3.19 ELISA | 第63页 |
| 3.3.20 流式细胞技术 | 第63-64页 |
| 3.3.21 脱靶效应分析 | 第64-65页 |
| 3.3.22 统计学分析及图形绘制 | 第65-66页 |
| 4. 实验结果 | 第66-88页 |
| 4.1 miR-146a抑制剂与miR-146a海绵抑制miR-146a表达 | 第66-71页 |
| 4.2 CRISPR/Cas9敲除miR-146a的构建与鉴定 | 第71-74页 |
| 4.3 LentiCRISPR/Cas9慢病毒介导的高效的基因编辑 | 第74-75页 |
| 4.4 敲除miR-146a的CRISPR/Cas9系统未检测到脱靶效应 | 第75-76页 |
| 4.5 LPS刺激敲除miR-146a细胞上调细胞因子表达 | 第76-80页 |
| 4.6 敲除miR-146a上调细胞因子和ISGs表达,并回复了T细胞耗竭标志的低表达 | 第80-84页 |
| 4.7 敲除miR-146a后抗病毒因子的表达增加,抑制HIV-1复制和再激活 | 第84-88页 |
| 5. 讨论与展望 | 第88-91页 |
| 6. 参考文献 | 第91-99页 |
| 7. 已发表及待发表论文 | 第99-100页 |
| 8. 致谢 | 第100-101页 |
