| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-22页 |
| 1.1 植物启动子的简介 | 第12-14页 |
| 1.1.1 启动子的概念 | 第12页 |
| 1.1.2 植物启动子的基本结构 | 第12-14页 |
| 1.2 植物启动子的分类 | 第14-16页 |
| 1.2.1 组成型启动子 | 第14-15页 |
| 1.2.2 诱导型启动子 | 第15-16页 |
| 1.2.3 组织特异性启动子 | 第16页 |
| 1.3 种子特异启动子 | 第16-20页 |
| 1.3.1 种子特异启动子的特点 | 第16-17页 |
| 1.3.2 种子特异启动子的应用 | 第17-18页 |
| 1.3.3 棉花基因启动子的克隆及应用 | 第18-20页 |
| 1.4 脂肪酸链延长酶基因 | 第20-21页 |
| 1.5 本研究的目的意义 | 第21-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-36页 |
| 2.1 试验材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第22页 |
| 2.1.2 载体及试剂 | 第22页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第22-23页 |
| 2.2 启动子片段的克隆与序列分析 | 第23-30页 |
| 2.2.1 基因组 DNA 的提取 | 第23-24页 |
| 2.2.2 α和 D 启动子片段的克隆 | 第24-26页 |
| 2.2.3 α和 D 克隆片段的纯化 | 第26-27页 |
| 2.2.4 α和 D 克隆载体的构建 | 第27-29页 |
| 2.2.5 质粒 DNA 的微量提取（碱法） | 第29页 |
| 2.2.6 酶切反应 | 第29-30页 |
| 2.3 植物表达载体的构建 | 第30-31页 |
| 2.3.1 表达载体 pBI121-α和 pBI121-D 的构建 | 第30页 |
| 2.3.2 中间载体 PAUX-α-Δ9 和 PAUX-D-Δ9 的构建 | 第30-31页 |
| 2.3.3 表达载体 pCamBAR-α-Δ9 和 pCamBAR-D-Δ9 的构建 | 第31页 |
| 2.4 植物表达载体的转化 | 第31-33页 |
| 2.4.1 农杆菌感受态的制备 | 第31-32页 |
| 2.4.2 转化农杆菌感受态细胞 | 第32页 |
| 2.4.3 拟南芥的转化 | 第32页 |
| 2.4.4 棉花的转化 | 第32-33页 |
| 2.5 拟南芥阳性株的筛选和鉴定 | 第33-34页 |
| 2.5.1 转基因拟南芥的鉴定 | 第33页 |
| 2.5.2 转基因拟南芥的分子检测 | 第33页 |
| 2.5.3 转 pBI121-α、pBI121-D 的拟南芥的 GUS 检测 | 第33-34页 |
| 2.5.4 转 pCamBAR-α-Δ9、pCamBAR-D-Δ9 的拟南芥脂肪酸含量检测 | 第34页 |
| 2.6 棉花阳性株的筛选和鉴定 | 第34-36页 |
| 2.6.1 除草剂检测 | 第34页 |
| 2.6.2 PCR 检测 | 第34页 |
| 2.6.3 实时荧光定量 PCR 进行外源基因Δ9Elo 的拷贝数鉴定 | 第34-36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-58页 |
| 3.1 启动子片段的克隆及序列分析 | 第36-42页 |
| 3.1.1 棉花基因组 DNA 的提取 | 第36页 |
| 3.1.2 启动子片段的扩增 | 第36-37页 |
| 3.1.3 阳性克隆载体的鉴定 | 第37页 |
| 3.1.4 α和 D 启动子片段的序列分析 | 第37-42页 |
| 3.2 载体的构建 | 第42-47页 |
| 3.2.1 表达载体 pBI121-α和 pBI121-D 的构建 | 第42-44页 |
| 3.2.2 中间载体 PAUX-α-Δ9 和 PAUX-D-Δ9 的构建 | 第44-47页 |
| 3.2.3 表达载体 pCamBAR-α-Δ9 和 pCamBAR-D-Δ9 的构建 | 第47页 |
| 3.3 拟南芥阳性株的检测 | 第47-52页 |
| 3.3.1 转基因拟南芥的鉴定 | 第47-49页 |
| 3.3.2 转 pBI121-α和 pBI121-D 的拟南芥 GUS 染色 | 第49页 |
| 3.3.3 转 pCamBAR-α-Δ9 和 pCamBAR-D-Δ9 拟南芥脂肪酸测定 | 第49-52页 |
| 3.4 棉花阳性株的检测 | 第52-58页 |
| 3.4.1 转基因棉花的除草剂检测 | 第52-53页 |
| 3.4.2 转基因棉花的分子检测 | 第53页 |
| 3.4.3 转基因棉花荧光定量 PCR 分析 | 第53-58页 |
| 4 讨论 | 第58-63页 |
| 4.1 α和 D 启动子片段的序列分析 | 第58页 |
| 4.2 载体的构建及功能验证 | 第58-59页 |
| 4.3 提高拟南芥的转化效率的方法及注意事项 | 第59-60页 |
| 4.4 棉花的转化方法及其影响转化效率的因素 | 第60-61页 |
| 4.5 转基因植株外源基因拷贝数的检测方法 | 第61-63页 |
| 5 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 攻读硕士学位期间发表和撰写论文情况 | 第72页 |
