| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4页 |
| 第一章 文献综述 | 第7-29页 |
| 1.1 前言 | 第7-8页 |
| 1.2 合成生物学 | 第8-10页 |
| 1.2.1 合成生物学的定义 | 第8-9页 |
| 1.2.2 合成生物学与基因工程的异同点 | 第9页 |
| 1.2.3 合成生物学在生物燃料方面的应用 | 第9-10页 |
| 1.2.4 合成生物学的伦理道德和生物安全 | 第10页 |
| 1.3 燃料醇类的代谢途径分析 | 第10-20页 |
| 1.3.1 酿酒酵母中燃料醇类的代谢途径分析 | 第11-13页 |
| 1.3.2 细长聚球藻中燃料醇类的代谢途径分析 | 第13-15页 |
| 1.3.3 大肠杆菌中燃料醇类的代谢途径分析 | 第15-20页 |
| 1.4 脱羧酶和脱氢酶 | 第20-22页 |
| 1.5 枯草芽孢杆菌表达系统 | 第22-26页 |
| 1.5.1 RNA聚合酶 | 第22-23页 |
| 1.5.2 启动子 | 第23-24页 |
| 1.5.3 核糖体结合位点 | 第24页 |
| 1.5.4 载体 | 第24-25页 |
| 1.5.5 外源蛋白的胞内表达 | 第25-26页 |
| 1.6 选题背景及研究思路 | 第26-29页 |
| 1.6.1 选题背景 | 第26-27页 |
| 1.6.2 研究内容及思路 | 第27-29页 |
| 第二章 B.Subtilis 168 中构建异丁醇合成代谢通路 | 第29-60页 |
| 2.1 实验材料 | 第29-33页 |
| 2.1.1 菌种与质粒 | 第29-30页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第30-31页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第31-32页 |
| 2.1.4 培养基 | 第32页 |
| 2.1.5 主要试剂 | 第32-33页 |
| 2.2 实验方法 | 第33-40页 |
| 2.2.1 细菌染色体DNA提取 | 第33-34页 |
| 2.2.2 酵母DNA的快速分离 | 第34页 |
| 2.2.3 琼脂糖凝胶电泳 | 第34页 |
| 2.2.4 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第34-35页 |
| 2.2.5 大肠杆菌的转化 | 第35页 |
| 2.2.6 利用α互补筛选目的转化子 | 第35页 |
| 2.2.7 大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的质粒提取 | 第35-36页 |
| 2.2.8 琼脂糖凝胶DNA回收 | 第36-37页 |
| 2.2.9 引物设计及PCR反应 | 第37页 |
| 2.2.10 PCR产物纯化 | 第37-39页 |
| 2.2.11 酶切体系 | 第39页 |
| 2.2.12 加A体系 | 第39-40页 |
| 2.2.13 连接体系 | 第40页 |
| 2.2.14 枯草芽孢杆菌Spizizen转化 | 第40页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第40-59页 |
| 2.3.1 表达载体pP的构建 | 第41-46页 |
| 2.3.2 重组载体pPK的构建 | 第46-52页 |
| 2.3.3 重组载体pPKA的构建 | 第52-55页 |
| 2.3.4 重组质粒pPKA转化B. subtilis 168 | 第55-56页 |
| 2.3.5 重组菌代谢异丁醇的定性实验 | 第56-59页 |
| 2.4 小结 | 第59-60页 |
| 第三章 B. Subtilis 168/pPKA发酵异丁醇条件优化 | 第60-67页 |
| 3.1 材料与方法 | 第60-62页 |
| 3.1.1 实验试剂 | 第60-61页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第61页 |
| 3.1.3 培养基 | 第61页 |
| 3.1.4 异丁醇浓度测定 | 第61-62页 |
| 3.2 结果与讨论 | 第62-66页 |
| 3.2.1 菌体生长曲线的测定 | 第62页 |
| 3.2.2 最佳发酵时间的测定 | 第62-63页 |
| 3.2.3 碳源（葡萄糖）最佳加入量的测定 | 第63页 |
| 3.2.4 缬氨酸最佳加入量测定 | 第63-64页 |
| 3.2.5 最佳接种量的测定 | 第64页 |
| 3.2.6 最佳装液量的测定 | 第64-66页 |
| 3.2.7 最佳初始pH的测定 | 第66页 |
| 3.3 小结 | 第66-67页 |
| 第四章 结论与展望 | 第67-69页 |
| 4.1 结论 | 第67页 |
| 4.2 创新点 | 第67页 |
| 4.3 展望 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
