| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 縮略语表 | 第13-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-34页 |
| 1 中国油菜生产现状 | 第15页 |
| 2 干旱对植物的影响 | 第15-21页 |
| 2.1 干旱对作物产量的影响 | 第15-16页 |
| 2.2 干旱条件下作物的生长及生理变化 | 第16-17页 |
| 2.3 植物响应干旱的分子及代谢机制 | 第17-18页 |
| 2.4 植物应答干旱的信号机制 | 第18-20页 |
| 2.5 植物细胞膜脂质的改变在抗旱中的作用 | 第20-21页 |
| 3 植物对N营养的响应 | 第21-27页 |
| 3.1 N营养对植物产量的影响 | 第21-23页 |
| 3.2 N营养与植物生长及生理变化 | 第23-24页 |
| 3.3 植物N同化吸收的分子代谢机制 | 第24页 |
| 3.4 植物中N信号的机理 | 第24-26页 |
| 3.5 植物细胞膜脂质组分的改变与N营养的关系 | 第26-27页 |
| 4 植物的磷脂酶D(PLD)及其对干旱和N营养的应答 | 第27-32页 |
| 4.1 植物中的磷脂酶种类 | 第27-28页 |
| 4.2 拟南芥中PLD基因家族及其亚家族分类 | 第28-29页 |
| 4.3 PLD的功能 | 第29-31页 |
| 4.3.1 细胞膜脂的水解或降解 | 第29-30页 |
| 4.3.2 细胞膜磷脂的重组 | 第30-31页 |
| 4.3.3 磷脂酸PA的形成与转化 | 第31页 |
| 4.4 PA介导的信号和代谢 | 第31-32页 |
| 4.5 PA与蛋白的互作 | 第32页 |
| 5 本实验的目的和意义 | 第32-34页 |
| 第二章 甘蓝型油菜气孔特异性超表达AtPLDα1增强植株的抗旱性及种子产量 | 第34-65页 |
| 1 前言 | 第34-36页 |
| 2 材料和方法 | 第36-45页 |
| 2.1 实验材料 | 第36-37页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第36页 |
| 2.1.2 实验所用菌株及载体 | 第36-37页 |
| 2.1.3 实验所用试剂 | 第37页 |
| 2.1.4 引物合成 | 第37页 |
| 2.2 实验方法 | 第37-45页 |
| 2.2.1 大肠杆菌DH5α(含PLDα1表达载体质粒)的培养及质粒提取 | 第37-38页 |
| 2.2.2 热击法转化PLDα1表达载体到农杆菌GV3101 | 第38页 |
| 2.2.3 油菜遗传转化(暗光培养法)及PLDα1超表达苗的检测 | 第38-39页 |
| 2.2.4 植物生长、农艺性状和土壤含水量 | 第39-40页 |
| 2.2.5 转基因植株RNA表达量检测 | 第40-41页 |
| 2.2.6 转基因植株蛋白表达检测和原位杂交 | 第41-43页 |
| 2.2.7 失水量、气孔开度、相对含水量及离子渗透 | 第43-44页 |
| 2.2.8 植株种子油分检测及种子发芽率调查 | 第44-45页 |
| 2.2.9 植株纯合体鉴定 | 第45页 |
| 3 结果及分析 | 第45-60页 |
| 3.1 PCR鉴定PLDα1菌株及转基因植株 | 第45-46页 |
| 3.1.1 PLDα1菌株的鉴定 | 第45-46页 |
| 3.1.2 PLDα1转基因植株的鉴定 | 第46页 |
| 3.2 转基因植株纯合体的筛选 | 第46-47页 |
| 3.3 转基因植株中PLDα1的表达 | 第47-49页 |
| 3.3.1 转基因植株RNA的表达 | 第47-48页 |
| 3.3.2 转基因植株蛋白的表达 | 第48-49页 |
| 3.4 转基因植株减少水分的丧失 | 第49-52页 |
| 3.4.1 AtPLDα1-OE植株的气孔对ABA更敏感 | 第49页 |
| 3.4.2 AtPLDα1-OE植株的离体叶片水分流失减少 | 第49-50页 |
| 3.4.3 AtPLDα1-OE植株叶片的相对含水率增加、相对离子电导率降低 | 第50页 |
| 3.4.4 干旱条件下AtPLDα1-OE植株中相关基因的表达量 | 第50-52页 |
| 3.5 田间PLDα1-OE材料的花期及生长变化 | 第52-57页 |
| 3.5.1 田间干旱条件下的PLDα1-OE材料加速气孔关闭 | 第52页 |
| 3.5.2 田间生长的PLDα1-OE材料花期推迟 | 第52-53页 |
| 3.5.3 田间PLDα1-OE材料生长加快 | 第53页 |
| 3.5.4 田间PLDα1-OE材料农艺性状的变化 | 第53-55页 |
| 3.5.5 田间PLDα1-OE材料种子产量提高 | 第55-56页 |
| 3.5.6 田间PLDα1-OE材料种子油分的改变 | 第56-57页 |
| 3.6 PLDα1-OE种子和幼苗对ABA、NaCl及干旱的响应 | 第57-60页 |
| 3.6.1 PLDα1-OE材料种子对ABA、NaCl及干旱的响应 | 第57-58页 |
| 3.6.2 PLDα1-OE材料幼苗对ABA、NaCl及干旱的响应 | 第58-60页 |
| 4 讨论 | 第60-65页 |
| 4.1 影响AtKatIpro::PLDα1-OE植株花期推迟的潜在机制 | 第60-62页 |
| 4.2 AtKatIpro::PLDα1-OE植株种子的油分改变 | 第62-63页 |
| 4.3 AtKatIpro::PLDα1-OE植株耐盐性增加及产量提高 | 第63-65页 |
| 第三章 甘蓝型油菜中过表达PLDe促进植株对氮信号响应过程中的侧根生长和生物产量积累 | 第65-95页 |
| 1 前言 | 第65-67页 |
| 2 材料和方法 | 第67-74页 |
| 2.1 实验材料 | 第67-68页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第67页 |
| 2.1.2 实验所用菌株及载体 | 第67页 |
| 2.1.3 实验所用试剂 | 第67页 |
| 2.1.4 引物合成 | 第67-68页 |
| 2.2 实验方法 | 第68-74页 |
| 2.2.1 大肠杆菌DH5α(含PLDe表达载体质粒)的培养及质粒提取 | 第68页 |
| 2.2.2 电击法转化PLDε表达载体到农杆菌GV3101 | 第68页 |
| 2.2.3 PLDε基因的油菜遗传转化及转基因苗检测 | 第68页 |
| 2.2.4 植物生长及田间农艺性状调查 | 第68-69页 |
| 2.2.5 转基因植株RNA的提取及real time PCR | 第69-70页 |
| 2.2.6 转基因植株蛋白质的提取、纯化、免疫印迹及YFP观察 | 第70-71页 |
| 2.2.7 植株N吸收及N转运相关蛋白NR、NiR的活性分析 | 第71-72页 |
| 2.2.8 植株叶片、表皮细胞及叶肉细胞大小的测量 | 第72页 |
| 2.2.9 植株叶片花青素及叶绿素含量的分析 | 第72页 |
| 2.2.10 植株种子含油量 | 第72-73页 |
| 2.2.11 植物组织脂类的提取 | 第73页 |
| 2.2.12 转PLDε植株纯合体鉴定、侧根数及根长调查 | 第73-74页 |
| 3 结果及分析 | 第74-89页 |
| 3.1 PCR鉴定PLDε菌株及转基因植株 | 第74页 |
| 3.1.1 含PLDε质粒菌株的鉴定 | 第74页 |
| 3.1.2 PLDε转基因植株的鉴定 | 第74页 |
| 3.2 转PLDε基因植株纯合体的筛选 | 第74-75页 |
| 3.3 转基因植株中PLDε的表达 | 第75-76页 |
| 3.3.1 转PLDε基因植株RNA的表达 | 第75-76页 |
| 3.3.2 转基因植株蛋白质的表达 | 第76页 |
| 3.4 PLDε-OE植株N营养的吸收利用 | 第76-78页 |
| 3.4.1 纯合体中AtPLDε、NRT1.1及NRT2.1的表达量分析 | 第76-77页 |
| 3.4.2 N营养的吸收效率 | 第77-78页 |
| 3.4.3 PLDε-OE植株中NR及NiR酶活性增强 | 第78页 |
| 3.5 PLDε-OE植株老叶中花青素含量增加和绿素含量降低 | 第78-80页 |
| 3.6. 植株生物产量的变化 | 第80-81页 |
| 3.7 植株叶片及根的形态变化 | 第81-83页 |
| 3.7.1 PLDε-OE植株叶面积增加 | 第81-82页 |
| 3.7.2 PLDε-OE植株增加了侧根数及长度 | 第82-83页 |
| 3.8 PLDε影响根的形态 | 第83-84页 |
| 3.9 PLDε影响植物花期及生长 | 第84-85页 |
| 3.10 PLDε影响植物种子产量及油分 | 第85-88页 |
| 3.10.1 PLDε-OE植株田间产量增加 | 第85-86页 |
| 3.10.2 PLDε-OE植株种子油分改变 | 第86-88页 |
| 3.11 PLDε-OE植物叶片脂成分发生变化 | 第88-89页 |
| 4 讨论 | 第89-95页 |
| 4.1 PLDε促进植株N利用并提高种子产量 | 第89-90页 |
| 4.2 PLDε影响植株花期和促进植物N响应的潜在机制 | 第90-91页 |
| 4.3 PLDε能否促进老叶中的N向新叶中转移? | 第91-93页 |
| 4.4 转PLDε植株叶片脂成分改变 | 第93-95页 |
| 第四章 总结 | 第95-97页 |
| 参考文献 | 第97-117页 |
| 附录1 | 第117-125页 |
| 附录2 致谢 | 第125-126页 |
| 作者简介 | 第126页 |
