| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-15页 |
| 前言 | 第15-17页 |
| 第一部分 文献综述 | 第17-37页 |
| 1 重金属铅的概述 | 第17-29页 |
| ·重金属元素铅(Pb)的理化性质 | 第17-18页 |
| ·铅污染及其来源 | 第18-21页 |
| ·铅对人和动物的危害作用 | 第21-26页 |
| ·铅对神经系统的损害 | 第21-22页 |
| ·铅对骨髓造血系统的损害 | 第22-23页 |
| ·铅对心血管系统的损害 | 第23页 |
| ·铅对消化系统的损害 | 第23-24页 |
| ·铅对肾脏的损害 | 第24页 |
| ·铅对生殖系统的损害 | 第24-25页 |
| ·铅对免疫系统的损害 | 第25页 |
| ·铅的致癌、致畸、致突变作用 | 第25-26页 |
| ·铅中毒的发病机理 | 第26-27页 |
| ·铅与Ca~(2+)等的竞争作用 | 第26页 |
| ·铅的氧化损伤作用 | 第26-27页 |
| ·铅的基因损伤作用 | 第27页 |
| ·铅的细胞凋亡作用 | 第27页 |
| ·铅中毒的防治措施 | 第27-29页 |
| 2 铅检测方法研究进展 | 第29-37页 |
| ·传统检测方法 | 第29-32页 |
| ·双硫腙比色法 | 第29-30页 |
| ·离子交换色谱法 | 第30页 |
| ·原子吸收光谱法 | 第30-31页 |
| ·阳极溶出伏安法(ASV) | 第31-32页 |
| ·免疫学检测方法 | 第32-37页 |
| ·生物传感器法 | 第32页 |
| ·多克隆抗体免疫检测法 | 第32-33页 |
| ·单克隆抗体免疫检测法 | 第33-35页 |
| ·免疫胶体金快速检测 | 第35-37页 |
| 第二部分 研究内容 | 第37-75页 |
| 试验一 重金属铅完全抗原的制备与鉴定 | 第37-48页 |
| 1 材料和设备 | 第37-38页 |
| ·主要试剂 | 第37页 |
| ·主要仪器设备 | 第37-38页 |
| ·试验动物 | 第38页 |
| ·主要溶液配制 | 第38页 |
| 2 试验内容和方法 | 第38-42页 |
| ·铅完全抗原的制备 | 第38-40页 |
| ·主要溶液配制 | 第38-39页 |
| ·免疫抗原pb~(2+)-SCN-CHX-A"-DTPA-KLH的制备 | 第39页 |
| ·检测抗原pb~(2+)-SCN-CHX-A"-DTPA-BSA的制备 | 第39页 |
| ·检测抗原SCN-CHX-A"-DTPA-BSA的制备 | 第39-40页 |
| ·抗原的紫外扫描分析 | 第40页 |
| ·小鼠免疫 | 第40页 |
| ·最佳封闭液的确定(间接ELISA法) | 第40-41页 |
| ·检测抗原最佳包被浓度的测定(方阵间接ELISA法) | 第41页 |
| ·免疫小鼠血清抗体效价的测定 | 第41页 |
| ·免疫小鼠血清特异性的测定 | 第41-42页 |
| 3 试验结果与分析 | 第42-45页 |
| ·免疫抗原及检测抗原紫外扫描结果 | 第42-43页 |
| ·最佳封闭液的确定 | 第43页 |
| ·检测抗原最佳包被浓度的测定 | 第43-44页 |
| ·免疫小鼠血清抗体效价的测定 | 第44-45页 |
| ·免疫小鼠血清特异性的测定 | 第45页 |
| 4 讨论 | 第45-47页 |
| ·螯合剂的选择是决定抗体识别的重要因素 | 第45-46页 |
| ·载体蛋白是铅完全抗原合成的重要因子 | 第46-47页 |
| 5 小结 | 第47-48页 |
| 试验二 重金属铅离子单克隆抗体的制备及特性鉴定 | 第48-65页 |
| 1 材料和设备 | 第48-49页 |
| ·主要试剂 | 第48页 |
| ·主要仪器设备和耗材 | 第48页 |
| ·试验动物和细胞 | 第48页 |
| ·主要溶液配制 | 第48-49页 |
| 2 试验内容和方法 | 第49-55页 |
| ·抗铅单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立 | 第49-53页 |
| ·小鼠免疫 | 第49页 |
| ·饲养细胞的制备 | 第49-50页 |
| ·免疫小鼠脾细胞悬液的制备 | 第50页 |
| ·骨髓瘤细胞(SP2/0)悬液的制备 | 第50页 |
| ·小鼠免疫脾细胞与骨髓瘤细胞融合 | 第50-51页 |
| ·抗铅单克隆抗体杂交瘤细胞株的筛选 | 第51页 |
| ·杂交瘤细胞株的克隆 | 第51-52页 |
| ·杂交瘤细胞株的冻存 | 第52页 |
| ·杂交瘤细胞株的复苏 | 第52页 |
| ·抗铅单克隆抗体的大量制备 | 第52-53页 |
| ·抗铅单克隆抗体的纯化 | 第53页 |
| ·杂交瘤细胞及抗铅单克隆抗体特异性分析 | 第53-55页 |
| ·杂交瘤细胞染色体分析 | 第53-54页 |
| ·抗铅单克隆抗体亚类鉴定 | 第54页 |
| ·非竞争ELISA法测定单克隆抗体对铅的亲和性 | 第54页 |
| ·抗铅单克隆抗体灵敏度分析 | 第54-55页 |
| ·抗铅单克隆抗体特异性分析 | 第55页 |
| ·杂交瘤细胞株及单克隆抗体的稳定性观察 | 第55页 |
| 3 试验结果与分析 | 第55-60页 |
| ·细胞融合、筛选和克隆 | 第55-56页 |
| ·杂交瘤细胞染色体鉴定 | 第56-57页 |
| ·抗铅单克隆抗体亚类鉴定 | 第57页 |
| ·抗铅单克隆抗体对铅亲和性的测定 | 第57-58页 |
| ·抗铅单克隆抗体灵敏度分析 | 第58-59页 |
| ·抗铅单克隆抗体特异性分析 | 第59-60页 |
| ·杂交瘤细胞株及单克隆抗体的稳定性分析 | 第60页 |
| 4 讨论 | 第60-64页 |
| ·影响细胞融合率的因素 | 第60-61页 |
| ·杂交瘤细胞株的筛选和克隆 | 第61-62页 |
| ·抗铅单克隆抗体的亲和力 | 第62页 |
| ·单抗亚类鉴定 | 第62-63页 |
| ·影响单克隆抗体稳定性的因素 | 第63-64页 |
| 5 小结 | 第64-65页 |
| 试验三 重金属铅间接竞争ELISA检测方法的建立 | 第65-75页 |
| 1 材料和设备 | 第65页 |
| ·主要试剂 | 第65页 |
| ·主要仪器设备和耗材 | 第65页 |
| ·主要缓冲溶液的配置 | 第65页 |
| 2 试验内容和方法 | 第65-68页 |
| ·间接竞争ELISA最佳工作条件的确定 | 第66-68页 |
| ·检测抗原和抗铅单克隆抗体最佳工作浓度的确定 | 第66页 |
| ·检测抗原最佳包被条件的确定 | 第66页 |
| ·最佳封闭液的确定 | 第66-67页 |
| ·封闭液最佳封闭条件的确定 | 第67页 |
| ·抗铅单克隆抗体最佳工作时间的确定 | 第67页 |
| ·酶标二抗(将辣根酶标记的羊抗鼠抗体)最佳工作浓度的确定 | 第67页 |
| ·酶标二抗(将辣根酶标记的羊抗鼠抗体)最佳作用时间的确定 | 第67页 |
| ·底物最佳作用时间的确定 | 第67页 |
| ·螯合剂DTPA最佳工作浓度的确定 | 第67-68页 |
| ·铅标准检测曲线的建立 | 第68页 |
| 3 试验结果与分析 | 第68-73页 |
| ·间接竞争ELISA最佳工作条件的确定 | 第68-72页 |
| ·检测抗原和抗铅单克隆抗体最佳工作浓度的确定 | 第68-69页 |
| ·检测抗原最佳包被条件的确定 | 第69页 |
| ·最佳封闭液的确定 | 第69页 |
| ·最佳封闭条件确定 | 第69-70页 |
| ·抗铅单克隆抗体最佳工作时间的确定 | 第70页 |
| ·酶标二抗(辣根酶标记的羊抗鼠抗体)最佳工作浓度的确定 | 第70-71页 |
| ·酶标二抗(辣根酶标记的羊抗鼠抗体)最佳工作时间的确定 | 第71页 |
| ·底物最佳作用时间的确定 | 第71页 |
| ·螯合剂DTPA最佳工作浓度的确定 | 第71-72页 |
| ·标准检测曲线的建立 | 第72-73页 |
| 4 讨论 | 第73-74页 |
| ·包被条件的选择 | 第73页 |
| ·封闭液的选择 | 第73-74页 |
| ·酶标二抗最佳工作条件的选择 | 第74页 |
| ·显色系统的选择 | 第74页 |
| 5 小结 | 第74-75页 |
| 试验结论 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
