| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 英文缩写说明 | 第7-8页 |
| 目录 | 第8-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-27页 |
| 1 靶向FtsZ的细胞分裂抑制剂研究进展 | 第12-24页 |
| ·FtsZ在细胞分裂中的作用 | 第12-13页 |
| ·FtsZ抑制剂筛选模型 | 第13-16页 |
| ·靶向FtsZ的细胞分裂抑制剂 | 第16-24页 |
| ·FtsZ作为筛选靶标的应用前景 | 第24页 |
| 2 植物内生菌 | 第24-25页 |
| 3 立项依据 | 第25-27页 |
| 第二章 FTSZ基因在E.COLI中的克隆表达 | 第27-53页 |
| 1 材料 | 第27-32页 |
| ·化学药品和生化试剂 | 第27-29页 |
| ·酶 | 第27页 |
| ·生化试剂 | 第27-29页 |
| ·培养基组分 | 第29页 |
| ·菌种和质粒 | 第29-30页 |
| ·菌种 | 第29-30页 |
| ·质粒 | 第30页 |
| ·培养基配方 | 第30页 |
| ·所用的缓冲液 | 第30-32页 |
| ·仪器设备 | 第32页 |
| 2 试验方法 | 第32-42页 |
| ·菌种的培养和保藏 | 第32-33页 |
| ·碱变性法微量提取质粒 | 第33页 |
| ·DNA片段凝胶回收 | 第33-34页 |
| ·质粒DNA的酶切 | 第34页 |
| ·质粒与外源片段的连接 | 第34-35页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(CaCl_2法) | 第35页 |
| ·大肠杆菌质粒的转化 | 第35页 |
| ·E.coli DH5α总DNA的提取 | 第35-36页 |
| ·PCR扩增 | 第36-37页 |
| ·ftsZ基因亚克隆的构建和DNA序列的测定 | 第37页 |
| ·带有或不带有His-tag的载体和表达工程菌的构建 | 第37-39页 |
| ·诱导表达和样品处理 | 第39-40页 |
| ·SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第40-41页 |
| ·BCA法测定蛋白质浓度 | 第41-42页 |
| ·NADH法测定FtsZ酶活性 | 第42页 |
| 3 结果与讨论 | 第42-51页 |
| ·总DNA提取 | 第42-43页 |
| ·亚克隆载体的构建 | 第43-45页 |
| ·带BamHⅠ和HindⅢ酶切位点的ftsZ基因的克隆 | 第43-44页 |
| ·亚克隆载体的构建 | 第44-45页 |
| ·ftsZ基因的测序 | 第45-46页 |
| ·表达载体的构建 | 第46-48页 |
| ·带NdeⅠ和HindⅢ酶切位点的ftsZ基因的克隆 | 第46页 |
| ·带有或不带有His-tag的载体和表达工程菌的构建 | 第46-48页 |
| ·质粒的表达和验证 | 第48-51页 |
| ·FtsZ的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第48-49页 |
| ·BCA法测定蛋白浓度结果 | 第49-50页 |
| ·FtsZ粗酶活性的测定 | 第50-51页 |
| 4 讨论 | 第51-52页 |
| 5 结论 | 第52-53页 |
| 第三章 FTSZ蛋白酶学特性的研究 | 第53-69页 |
| 1 材料 | 第53-56页 |
| ·化学药品和生化试剂 | 第53-54页 |
| ·酶 | 第53页 |
| ·生化试剂 | 第53-54页 |
| ·溶液配制 | 第54-55页 |
| ·蛋白纯化缓冲液 | 第54-55页 |
| ·缓冲液 | 第55页 |
| ·孔雀石绿-磷钼杂多酸分光光度法反应液配制 | 第55页 |
| ·仪器设备 | 第55-56页 |
| 2 方法 | 第56-60页 |
| ·融合蛋白的分离纯化 | 第56-57页 |
| ·粗酶液的制备 | 第56页 |
| ·亲和层析 | 第56页 |
| ·透析 | 第56-57页 |
| ·冻干 | 第57页 |
| ·孔雀石绿-磷钼杂多酸分光光度法测定FtsZ的酶活性方法的建立 | 第57-58页 |
| ·磷标准曲线的绘制 | 第57页 |
| ·FtsZ酶活力的测定方法 | 第57-58页 |
| ·FtsZ分级纯化的酶活力测定 | 第58页 |
| ·FtsZ蛋白酶学性质的测定 | 第58-60页 |
| ·FtsZ酶反应速率的测定 | 第58页 |
| ·FtsZ酶最适反应pH的测定 | 第58-59页 |
| ·FtsZ酶最适反应温度的测定 | 第59页 |
| ·金属离子对FtsZ酶活力的影响 | 第59页 |
| ·米氏常数的测定 | 第59-60页 |
| ·酶的pH稳定性 | 第60页 |
| ·酶的温度稳定性 | 第60页 |
| ·低温保存对酶稳定性影响 | 第60页 |
| ·反复冻融对酶稳定性影响试验 | 第60页 |
| 3 结果 | 第60-68页 |
| ·FtsZ融合蛋白的分离纯化 | 第60-61页 |
| ·孔雀石绿-磷钼杂多酸分光光度法测定分级纯化后FtsZ酶活性结果 | 第61-62页 |
| ·磷标准曲线的绘制 | 第61-62页 |
| ·酶的纯化比活 | 第62页 |
| ·FtsZ蛋白的酶学性质 | 第62-68页 |
| ·酶反应速率 | 第62-63页 |
| ·最适反应pH | 第63-64页 |
| ·最适反应温度 | 第64页 |
| ·金属离子对酶活的影响 | 第64-65页 |
| ·米氏常数的测定 | 第65-66页 |
| ·酶的pH稳定性 | 第66-67页 |
| ·酶的温度稳定性 | 第67-68页 |
| ·低温保存对酶稳定性影响试验 | 第68页 |
| 4 结论 | 第68-69页 |
| 第四章:靶向FTSZ的细胞分裂抑制剂筛选模型的建立及样品筛选 | 第69-89页 |
| 1 材料 | 第69-71页 |
| ·试剂 | 第69-70页 |
| ·溶液配制 | 第70页 |
| ·仪器设备 | 第70页 |
| ·培养基 | 第70-71页 |
| 2 方法 | 第71-76页 |
| ·植物内生菌发酵液的制备 | 第71-73页 |
| ·植物标本的内生菌分离 | 第71-72页 |
| ·植物标本的前处理 | 第71页 |
| ·植物标本的消毒及接种 | 第71页 |
| ·植物内生菌的分离 | 第71-72页 |
| ·植物内生菌发酵液的制备 | 第72-73页 |
| ·比浊法测定植物内生菌发酵液样品对E.coli的抑菌作用 | 第73-74页 |
| ·样品板的处理 | 第73页 |
| ·样品测定 | 第73-74页 |
| ·靶向FtsZ的细胞分裂抑制剂模型的建立 | 第74-75页 |
| ·样品板的处理 | 第74页 |
| ·反应体系 | 第74-75页 |
| ·反应过程 | 第75页 |
| ·阳性对照抑制效果测定 | 第75页 |
| ·高通量筛选法的应用 | 第75页 |
| ·复筛 | 第75-76页 |
| ·复筛阳性样品的验证 | 第76页 |
| ·抑菌圈测定 | 第76页 |
| ·鉴定菌菌液的制备 | 第76页 |
| ·抑菌圈测定 | 第76页 |
| 3 结果 | 第76-87页 |
| ·比浊法测定植物内生菌发酵液样品对E.coli的抑菌作用结果 | 第76-77页 |
| ·高通量筛选模型的建立 | 第77页 |
| ·高通量筛选结果 | 第77-82页 |
| ·复筛结果 | 第82-83页 |
| ·复筛阳性样品的验证 | 第83-86页 |
| ·抑菌圈测定结果 | 第86页 |
| ·筛选结果汇总 | 第86-87页 |
| 4 讨论 | 第87-88页 |
| 5 结论 | 第88-89页 |
| 全文总结 | 第89-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-94页 |
| 附录 | 第94-141页 |
| 1、测序结果比对 | 第94-96页 |
| 2、全细胞筛选和酶水平筛选结果比对 | 第96-141页 |
