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莱菔硫烷对镉暴露小鼠睾丸生精细胞保护机制的研究

摘要第10-11页
Abstract第11页
中英文缩略词表第12-13页
1 前言第13-19页
    1.1 镉的雄性生殖毒性研究第13-14页
    1.2 拮抗镉生殖毒性的研究第14-15页
    1.3 莱菔硫烷的抗癌作用第15页
    1.4 莱菔硫烷对神经的保护作用第15页
    1.5 莱菔硫烷的抗氧化损伤作用第15-16页
    1.6 莱菔硫烷与镉的相互作用研究第16页
    1.7 Nrf2-Keap1/ARE信号通路第16-17页
    1.8 试验目的和意义第17-19页
2 材料与方法第19-32页
    2.1 主要仪器与试剂第19-21页
        2.1.1 主要仪器第19页
        2.1.2 主要试剂第19-21页
        2.1.3 实验动物第21页
    2.2 生精细胞的分离培养与鉴定第21-22页
        2.2.1 生精细胞的分离与培养第21页
        2.2.2 生精细胞的鉴定第21-22页
    2.3 试验模型的建立第22-23页
        2.3.1 镉对生精细胞相对存活率的检测第22页
        2.3.2 莱菔硫烷对生精细胞相对存活率的检测第22页
        2.3.3 镉与莱菔硫烷联合作用对生精细胞相对存活率的检测第22-23页
    2.4 生精细胞活性检测第23页
    2.5 生精细胞凋亡率的检测第23-24页
        2.5.1 AO/EB双染法检测生精细胞凋亡第23-24页
        2.5.2 FITC-Annexen-V/PI双染法检测生精细胞凋亡第24页
    2.6 抗氧化功能的检测第24页
    2.7 生精细胞Nrf2、NQO1、HO-1、γ-GCS的mRNA表达量检测第24-28页
        2.7.1 引物设计与合成第24-25页
        2.7.2 小鼠生精细胞RNA的提取第25页
        2.7.3 RNA的检测第25页
        2.7.4 RNA反转录反应第25-26页
        2.7.5 确定PCR反应条件及验证引物的特异性第26页
        2.7.6 qPCR反应第26-28页
    2.8 生精细胞Nrf2、HO-1、γ-GCS、NQO1蛋白表达量检测第28-31页
        2.8.1 蛋白的提取及定量第28页
        2.8.2 SDS-PAGE电泳第28-31页
    2.9 数据的统计与分析第31-32页
3 结果与分析第32-42页
    3.1 小鼠生精细胞体外培养及鉴定结果第32-33页
    3.2 试验模型建立结果第33-35页
        3.2.1 镉对生精细胞相对存活率的检测结果第33页
        3.2.2 莱菔硫烷对生精细胞相对存活率的检测结果第33-34页
        3.2.3 Cd与Sfn对生精细胞相对存活率的检测结果第34-35页
    3.3 乳酸脱氢酶活性的检测结果第35页
    3.4 生精细胞凋亡的检测结果第35-37页
        3.4.1 AO/EB双染法检测生精细胞凋亡结果第35-36页
        3.4.2 FITC-Annexen-V/PI双染法检测生精细胞凋亡结果第36-37页
    3.5 生精细胞抗氧化功能的检测结果第37页
        3.5.1 生精细胞SOD活性检测结果第37页
        3.5.2 生精细胞MDA含量检测结果第37页
    3.6 生精细胞Nrf2、HO-1、γ-GCS、NQO1mRNA和蛋白表达检测结果第37-42页
        3.6.1 Nrf2、HO-1、γ-GCS、NQO1及内参引物的特异性检测结果第37页
        3.6.2 Nrf2、HO-1、γ-GCS、NQO1及内参qPCR引物特异性及标准曲线结果.第37-38页
        3.6.3 生精细胞Nrf2的mRNA及蛋白表达结果第38-39页
        3.6.4 生精细胞HO-1的mRNA及蛋白表达结果第39页
        3.6.5 生精细胞γ-GCS的mRNA及蛋白表达结果第39-40页
        3.6.6 生精细胞NQO1的mRNA及蛋白表达结果第40-42页
4 讨论第42-45页
5 结论第45-46页
参考文献第46-51页
附录第51-57页
致谢第57-58页
攻读硕士研究生期间发表的文章第58-59页

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