| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 主要符号表 | 第13-14页 |
| 第一部分 绪论 | 第14-31页 |
| 1.1 尿路结石病简介 | 第14页 |
| 1.2 草酸及草酸降解微生物对机体的影响 | 第14-16页 |
| 1.3 枯草芽孢杆菌草酸脱羧酶性质与结构 | 第16页 |
| 1.4 菌影 | 第16-17页 |
| 1.5 草酸的产生和功能 | 第17-18页 |
| 1.6 高草酸尿症的定义 | 第18页 |
| 1.7 病理生理学和病原学 | 第18-21页 |
| 1.7.1 原发性高草酸尿症 | 第18-19页 |
| 1.7.2 肠源性高草酸尿症 | 第19-20页 |
| 1.7.3 食源性高草酸尿症 | 第20-21页 |
| 1.7.4 特发性高草酸尿症 | 第21页 |
| 1.8 流行病学 | 第21页 |
| 1.9 国际数据统计 | 第21-22页 |
| 1.10 高草酸尿症的年龄分布 | 第22页 |
| 1.11 高草酸尿症性别分布 | 第22-23页 |
| 1.12 高草酸尿症种族的患病率 | 第23页 |
| 1.13 预后诊断 | 第23-24页 |
| 1.14 高草酸尿症的临床研究与分析 | 第24-26页 |
| 1.14.1 临床表现 | 第24-25页 |
| 1.14.2 饮食问卷调查 | 第25页 |
| 1.14.3 常规治疗原则 | 第25-26页 |
| 1.14.4 治疗的原发性高草酸尿症 | 第26页 |
| 1.14.5 大剂量吡哆醇(维生素b6)治疗 | 第26页 |
| 1.15 实验治疗高草酸尿症 | 第26-28页 |
| 1.15.1 产甲酸草酸杆菌的控制 | 第26-27页 |
| 1.15.2. 植物茎-根疗法 | 第27页 |
| 1.15.3. 其他实验治疗 | 第27-28页 |
| 1.16 手术治疗 | 第28页 |
| 1.16.1 碎石术 | 第28页 |
| 1.16.2 肝-肾移植 | 第28页 |
| 1.17 患者的饮食措施 | 第28-29页 |
| 1.18 本研究的目的及意义 | 第29-31页 |
| 1.18.1 研究目的 | 第29页 |
| 1.18.2 研究意义 | 第29-31页 |
| 第二部分 实验部分 | 第31-47页 |
| 2.1 实验材料、试剂与仪器 | 第31-37页 |
| 2.1.1 实验菌株、载体和引物 | 第31页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第31-32页 |
| 2.1.3 培养基 | 第32-33页 |
| 2.1.4 实验所用溶剂 | 第33-36页 |
| 2.1.4.1 细菌总DNA抽提的试剂 | 第33页 |
| 2.1.4.2 质粒DNA抽提试剂 | 第33-34页 |
| 2.1.4.3 DNA电泳相关试剂 | 第34页 |
| 2.1.4.4 诱导表达所用试剂 | 第34页 |
| 2.1.4.5 制备超级感受态相关的试剂 | 第34页 |
| 2.1.4.6 SDS-PAGE所用溶剂 | 第34-36页 |
| 2.1.4.7 Bradford法测蛋白质浓度所用试剂 | 第36页 |
| 2.1.4.8 蛋白纯化所用的试剂 | 第36页 |
| 2.1.5 主要仪器与设备 | 第36-37页 |
| 2.2 实验方法 | 第37-47页 |
| 2.2.1 Bacillus subtilis 168中oxdc基因的克隆 | 第37-39页 |
| 2.2.1.1 Bacillus subtilis 168基因组的制备 | 第37-38页 |
| 2.2.1.2 oxdc基因克隆 | 第38-39页 |
| 2.2.2 PCR产物连T载、转化、阳性克隆的筛选 | 第39-40页 |
| 2.2.2.2 PCR产物与T载连接、转化大肠杆菌 | 第39页 |
| 2.2.2.3 感受态细胞DH5α的制备 | 第39-40页 |
| 2.2.2.4 阳性克隆子的筛选 | 第40页 |
| 2.2.3 重组表达载体与诱导表达 | 第40-41页 |
| 2.2.3.1 重组oxdc-pGEX-6p-1表达载体 | 第40-41页 |
| 2.2.3.2 oxdc基因的诱导表达 | 第41页 |
| 2.2.4 GST-OxdC蛋白纯化 | 第41-42页 |
| 2.2.5 GST-OxdC蛋白柱上切除GST标签 | 第42-43页 |
| 2.2.6 考马斯亮蓝法测蛋白浓度 | 第43-44页 |
| 2.2.7 草酸浓度标准曲线的制作 | 第44-45页 |
| 2.2.8 菌影的制备 | 第45-46页 |
| 2.2.9 扫描电子显微镜样品制作 | 第46页 |
| 2.2.10 透射电子显微镜样品制作 | 第46页 |
| 2.2.11 草酸脱羧酶OxdC装载菌影 | 第46-47页 |
| 第三部分 实验结果与分析 | 第47-66页 |
| 3.1 oxdc基因的克隆及其生物信息学分析 | 第47-52页 |
| 3.1.1 提取枯草芽孢杆菌168菌株基因组 | 第47页 |
| 3.1.2 OxdC基因的克隆 | 第47-49页 |
| 3.1.3 oxdc基因的生物信息学分析 | 第49-52页 |
| 3.1.3.1 理化性质分析 | 第49-50页 |
| 3.1.3.2 疏水性分析 | 第50-51页 |
| 3.1.3.3 亚细胞定位预测 | 第51-52页 |
| 3.2 原核表达载体的构建 | 第52页 |
| 3.3 蛋白的表达 | 第52-53页 |
| 3.4 GST-OxdC蛋白的纯化 | 第53-54页 |
| 3.5 凝血酶柱上切除GST标签获得OxdC纯酶 | 第54页 |
| 3.6 草酸脱羧酶酶学性质测定 | 第54-56页 |
| 3.6.1 测定最适酶促反应pH | 第54-55页 |
| 3.6.2 测定最适酶促反应温度 | 第55-56页 |
| 3.7 金属离子对酶促反应的影响 | 第56-57页 |
| 3.8 草酸脱羧酶OxdC酶的稳定性 | 第57-59页 |
| 3.8.1 草酸脱羧酶的pH稳定性 | 第57-58页 |
| 3.8.2 酶的温度稳定性 | 第58-59页 |
| 3.9 菌影的制备 | 第59-64页 |
| 3.9.1 穿孔蛋白E基因信息 | 第59-60页 |
| 3.9.2 重组载体的构建 | 第60页 |
| 3.9.3 菌影的制备结果 | 第60-61页 |
| 3.9.4 扫描电镜与透射电镜观察 | 第61-64页 |
| 3.10 菌影包裹结果 | 第64页 |
| 3.11 菌影包裹草酸脱羧酶蛋白降解草酸的初步实验 | 第64-66页 |
| 第四部分 结论与展望 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
