| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 缩略语词汇表 | 第8-12页 |
| 前言 | 第12-13页 |
| 1 文献综述 | 第13-22页 |
| 1.1 水稻直播的研究概况 | 第13页 |
| 1.2 转录因子 | 第13-15页 |
| 1.2.1 转录因子的概念 | 第13页 |
| 1.2.2 转录因子的结构 | 第13-15页 |
| 1.3 植物中的MYB转录因子家族 | 第15-17页 |
| 1.3.1 MYB家族的概况与发展 | 第15页 |
| 1.3.2 MYB家族的结构特征与分类 | 第15-16页 |
| 1.3.3 MYB的功能 | 第16-17页 |
| 1.3.3.1 植物初生和次生代谢的调控 | 第16页 |
| 1.3.3.2 参与植物细胞形态和模式建成及植物多个生长发育过程 | 第16-17页 |
| 1.3.3.3 应答外界环境和植物激素等刺激 | 第17页 |
| 1.4 水稻中的MYB转录因子 | 第17-18页 |
| 1.5 CRISPR/Cas9基因组编辑技术 | 第18-22页 |
| 1.5.1 CRISPR/Cas系统的基本结构 | 第18-19页 |
| 1.5.2 CRISPR/Cas系统的分类及作用机制 | 第19-20页 |
| 1.5.3 CRISPR/Cas9靶位点选择及相关工具 | 第20-22页 |
| 2 玉米ZmMYB59基因在水稻中的功能分析 | 第22-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第22页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第22页 |
| 2.1.2 主要仪器设备 | 第22页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-29页 |
| 2.2.1 ZmMYB59过表达载体的遗传转化 | 第22-24页 |
| 2.2.2 转基因植株的PCR检测 | 第24页 |
| 2.2.2.1 水稻叶片基因组DNA的提取(CTAB法) | 第24页 |
| 2.2.2.2 转基因植株的PCR鉴定 | 第24页 |
| 2.2.3 种子萌发性状及不同处理条件下表型指标测定 | 第24-25页 |
| 2.2.3.1 0cm播深条件 | 第24-25页 |
| 2.2.3.2 幼苗试验 | 第25页 |
| 2.2.3.3 4cm播深条件 | 第25页 |
| 2.2.3.4 GA3处理 4 cm播深条件 | 第25页 |
| 2.2.4 生理生化指标的测定 | 第25-28页 |
| 2.2.4.1 脯氨酸测定 | 第25-26页 |
| 2.2.4.2 超氧化物歧化酶 | 第26-27页 |
| 2.2.4.3 过氧化物酶和过氧化氢酶 | 第27页 |
| 2.2.4.4 抗坏血酸过氧化物酶 | 第27-28页 |
| 2.2.4.5 丙二醛测定 | 第28页 |
| 2.2.5 植物电镜样品制备 | 第28-29页 |
| 2.2.6 数据分析 | 第29页 |
| 2.3 结果与分析 | 第29-34页 |
| 2.3.1 ZmMYB59过表达阳性植株的筛选 | 第29页 |
| 2.3.2 ZmMYB59过表达对水稻种子萌发性状及表型指标的影响 | 第29-32页 |
| 2.3.3 ZmMYB59过表达对水稻逆境相关生理生化指标的影响 | 第32-33页 |
| 2.3.4 ZmMYB59基因过表达对水稻中胚轴细胞的影响 | 第33-34页 |
| 2.4 讨论 | 第34-36页 |
| 3 水稻OsMYBAS1基因的克隆与序列分析 | 第36-49页 |
| 3.1 实验材料 | 第36页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第36页 |
| 3.1.2 实验药品 | 第36页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第36页 |
| 3.1.4 PCR引物 | 第36页 |
| 3.2 实验方法 | 第36-38页 |
| 3.2.1 水稻总RNA的提取 | 第36-37页 |
| 3.2.2 第一链cDNA的合成 | 第37页 |
| 3.2.3 OsMYBAS1基因的PCR扩增 | 第37-38页 |
| 3.2.4 PCR产物胶回收 | 第38页 |
| 3.2.5 OsMYBAS1基因的生物信息学分析 | 第38页 |
| 3.3 结果与分析 | 第38-48页 |
| 3.3.1 OsMYBAS1基因的克隆 | 第38-39页 |
| 3.3.2 OsMYBAS1蛋白基本理化性质和保守结构域 | 第39-40页 |
| 3.3.3 OsMYBAS1蛋白磷酸化和糖基化位点 | 第40-41页 |
| 3.3.4 OsMYBAS1蛋白信号肽、亚细胞定位和二级结构的预测结果 | 第41-43页 |
| 3.3.5 OsMYBAS1蛋白氨基酸序列的同源比对及进化树分析结果 | 第43-45页 |
| 3.3.6 OsMYBAS1基因启动子序列分析结果 | 第45-48页 |
| 3.4 讨论 | 第48-49页 |
| 4 水稻OsMYBAS1基因突变体植株的获得及功能分析 | 第49-61页 |
| 4.1 实验材料 | 第49页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第49页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第49页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第49页 |
| 4.2 实验方法 | 第49-51页 |
| 4.2.1 生物信息学查询及分析 | 第49-50页 |
| 4.2.2 OsMYBAS1的CRISPR/Cas9载体构建 | 第50页 |
| 4.2.2.1 制备Oligo二聚体 | 第50页 |
| 4.2.2.2 将Oligo二聚体构建至CRISPR/Cas载体 | 第50页 |
| 4.2.2.3 转化大肠杆菌 | 第50页 |
| 4.2.3 农杆菌介导水稻表达载体的遗传转化 | 第50页 |
| 4.2.4 转基因植株的初步筛选 | 第50-51页 |
| 4.2.4.1 水稻叶片基因组DNA的提取(CTAB法) | 第50页 |
| 4.2.4.2 转基因植株的PCR鉴定 | 第50-51页 |
| 4.2.5 CRISPR/Cas9的检测 | 第51页 |
| 4.2.6 种子萌发性状及不同处理条件下表型指标测定 | 第51页 |
| 4.2.7 生理生化指标的测定 | 第51页 |
| 4.2.8 植物电镜样品制备 | 第51页 |
| 4.2.9 数据分析 | 第51页 |
| 4.3 结果与分析 | 第51-59页 |
| 4.3.1 OsMYBAS1生物信息学分析及CRISPR引物设计 | 第51-52页 |
| 4.3.2 表达载体pCAMBlA1300::MYBAS1sgRNA::Cas9的构建 | 第52-53页 |
| 4.3.3 水稻转基因植株的获得 | 第53-54页 |
| 4.3.4 转基因植株T0代的初步筛选结果 | 第54页 |
| 4.3.5 CRISPR/Cas9效果检测结果 | 第54-55页 |
| 4.3.6 OsMYBAS1敲除对水稻种子萌发性状及表型指标的影响 | 第55-57页 |
| 4.3.7 OsMYBAS1敲除对水稻逆境相关生理生化指标的影响 | 第57-58页 |
| 4.3.8 OsMYBAS1敲除对水稻中胚轴细胞的影响 | 第58-59页 |
| 4.4 讨论 | 第59-61页 |
| 5 结论 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-69页 |
| 个人简介 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
