| 个人简历 | 第3-11页 |
| 摘要 | 第11-15页 |
| ABSTRACT | 第15-18页 |
| 前言 | 第19-22页 |
| 第一部分：全人源肝癌scFv抗体库的构建 | 第22-39页 |
| 一 材料与方法 | 第22-31页 |
| 1 材料 | 第22-25页 |
| 1.1 主要试剂和材料 | 第22页 |
| 1.2 质粒、菌株、细胞株、血样 | 第22-23页 |
| 1.3 主要仪器 | 第23页 |
| 1.4 试剂配方 | 第23-25页 |
| 2 方法 | 第25-31页 |
| 2.1 肝癌病人PBMC的分离提取 | 第25页 |
| 2.2 总RNA的提取 | 第25-26页 |
| 2.3 RT-PCR | 第26页 |
| 2.4 获得轻重链基因序列 | 第26-28页 |
| 2.5 Overlapping PCR | 第28-29页 |
| 2.6 构建pDisplay-scFv抗体库 | 第29-30页 |
| 2.7 抗体库的表达鉴定 | 第30-31页 |
| 二 结果与分析 | 第31-37页 |
| 1 总RNA的琼脂糖凝胶电泳结果 | 第31页 |
| 2 PCR产物琼脂糖凝胶电泳结果 | 第31-33页 |
| 2.1 VH和VL PCR产物琼脂糖凝胶电泳 | 第31-33页 |
| 2.2 Overlapping PCR产物琼脂糖凝胶电泳 | 第33页 |
| 2.3 菌液PCR产物琼脂糖凝胶电泳 | 第33页 |
| 3 测序结果 | 第33-37页 |
| 3.1 抗体库的活性 | 第33-35页 |
| 3.2 抗体库的多样性 | 第35页 |
| 3.3 抗体库库容量的鉴定 | 第35-36页 |
| 3.4 抗体库的表达鉴定 | 第36-37页 |
| 三 讨论 | 第37-38页 |
| 四 小结 | 第38-39页 |
| 第二部分：流式细胞分选 | 第39-49页 |
| 一 材料与方法 | 第39-43页 |
| 1 材料 | 第39-40页 |
| 1.1 主要试剂和材料 | 第39页 |
| 1.2 细胞株和质粒 | 第39页 |
| 1.3 主要仪器厂设备 | 第39-40页 |
| 1.4 主要试剂配方 | 第40页 |
| 2 方法 | 第40-43页 |
| 2.1 肝癌抗体库的流式细胞分选 | 第40-41页 |
| 2.2 第一轮流式细胞分选 | 第41-42页 |
| 2.3 第二轮流式细胞分选 | 第42页 |
| 2.4 第三轮流式细胞分选 | 第42-43页 |
| 二 实验结果与分析 | 第43-48页 |
| 1 肝癌抗体库的流式细胞分选鉴定 | 第43-44页 |
| 2 流式细胞分选 | 第44-47页 |
| 3 获得候选序列 | 第47-48页 |
| 三 讨论 | 第48页 |
| 四 小结 | 第48-49页 |
| 第三部分：抗GPC3全长抗体的构建 | 第49-58页 |
| 一 材料与方法 | 第49-54页 |
| 1 材料 | 第49-51页 |
| 1.1 主要试剂 | 第49页 |
| 1.2 细胞株和质粒 | 第49-50页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第50页 |
| 1.4 主要试剂配方 | 第50-51页 |
| 2 方法 | 第51-54页 |
| 2.1 获得抗体的轻重链 | 第51-52页 |
| 2.2 构建HXT1-VH质粒和HXT2-VL质粒 | 第52-53页 |
| 2.3 瞬时转染293E表达全长抗体 | 第53页 |
| 2.4 全长抗体的表达鉴定 | 第53-54页 |
| 2.5 全长抗体的纯化 | 第54页 |
| 二 结果与分析 | 第54-57页 |
| 1 PCR结果 | 第54-55页 |
| 2 表达鉴定 | 第55页 |
| 3 抗体的纯化 | 第55-57页 |
| 三 讨论 | 第57页 |
| 四 小结 | 第57-58页 |
| 第四部分：抗体的活性评价 | 第58-72页 |
| 一 材料与方法 | 第58-63页 |
| 1 材料 | 第58-59页 |
| 1.1 主要试剂 | 第58页 |
| 1.2 细胞株 | 第58页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第58-59页 |
| 2 方法 | 第59-63页 |
| 2.1 亲和检测-ELISA | 第59页 |
| 2.2 亲和检测-Fortebio | 第59页 |
| 2.3 细胞增殖实验 | 第59-60页 |
| 2.4 细胞周期实验 | 第60页 |
| 2.5 凋亡实验 | 第60-61页 |
| 2.6 划痕实验 | 第61页 |
| 2.7 mRNA水平的活性验证 | 第61-63页 |
| 二 结果与分析 | 第63-69页 |
| 1 亲和检测-ELISA | 第63-64页 |
| 2 亲和检测-Fortebio | 第64页 |
| 3 增殖抑制实验 | 第64-65页 |
| 4 细胞周期实验 | 第65-66页 |
| 5 凋亡实验 | 第66-67页 |
| 6 划痕实验 | 第67-68页 |
| 7 qPCR | 第68-69页 |
| 三 讨论 | 第69-70页 |
| 四 小结 | 第70-72页 |
| 第五部分：抗体作用机制的初步探索 | 第72-81页 |
| 一 材料与方法 | 第72-76页 |
| 1 材料 | 第72-73页 |
| 1.1 主要试剂 | 第72页 |
| 1.2 细胞株 | 第72页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第72-73页 |
| 2 方法 | 第73-76页 |
| 2.1 ADCC实验 | 第73页 |
| 2.2 mRNA水平上的机制探索 | 第73-75页 |
| 2.3 Western Blotting | 第75-76页 |
| 二 结果与分析 | 第76-79页 |
| 1 ADCC实验 | 第76-77页 |
| 2 qPCR | 第77-78页 |
| 3 Western Blotting | 第78-79页 |
| 三 讨论 | 第79-80页 |
| 四 小结 | 第80-81页 |
| 全文总结 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-86页 |
| 附录 | 第86-87页 |
| 综述 靶向GPC3的生物诊断和治疗策略的研究现状 | 第87-99页 |
| 参考文献 | 第95-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第100页 |