| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 本文所用英文缩写词表 | 第11-12页 |
| 第1章 绪论 | 第12-29页 |
| 1.1 核酸适配体与筛选方法 | 第12-16页 |
| 1.1.1 分子识别与核酸适配体 | 第12-13页 |
| 1.1.2 核酸适配体的发展及特性 | 第13-14页 |
| 1.1.3 核酸适配体的筛选方法 | 第14-16页 |
| 1.2 核酸适配体在肿瘤医药领域的应用 | 第16-28页 |
| 1.2.1 核酸适配体用于鉴定肿瘤标志物 | 第16-21页 |
| 1.2.2 核酸适配体用于循环肿瘤细胞研究 | 第21-23页 |
| 1.2.3 核酸适配体在免疫组化研究领域的应用 | 第23-25页 |
| 1.2.4 核酸适配体在靶向治疗领域的应用 | 第25-27页 |
| 1.2.5 核酸适配体的临床化进展 | 第27-28页 |
| 1.3 本论文的工作构想 | 第28-29页 |
| 第二章 筛选临床肝癌组织的核酸适配体 | 第29-44页 |
| 2.1 前言 | 第29-30页 |
| 2.2 实验部分 | 第30-36页 |
| 2.2.1 实验仪器与材料 | 第30-32页 |
| 2.2.2 文库与引物的设计 | 第32-33页 |
| 2.2.3 PCR退火温度的优化 | 第33页 |
| 2.2.4 筛选过程 | 第33-34页 |
| 2.2.5 PCR扩增 | 第34-35页 |
| 2.2.6 ssDNA的制备和定量 | 第35-36页 |
| 2.2.7 循环筛选和对最终文库的测序 | 第36页 |
| 2.2.8 序列分析 | 第36页 |
| 2.2.9 进化文库和核酸适配体候选序列的表征 | 第36页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第36-43页 |
| 2.3.1 实验原理 | 第36-37页 |
| 2.3.2 验证hnRNPA1在临床肝癌组织中的过表达 | 第37-38页 |
| 2.3.3 PCR退火温度优化 | 第38页 |
| 2.3.4 PCR循环轮数优化 | 第38-39页 |
| 2.3.5 探究BC15在PCR扩增中的扩增情况 | 第39页 |
| 2.3.6 筛选条件的控制 | 第39-40页 |
| 2.3.7 对文库亲和力进化的表征 | 第40-41页 |
| 2.3.8 对测序结果的分析 | 第41-42页 |
| 2.3.9 考察候选序列对肝癌组织的结合能力 | 第42-43页 |
| 2.4 小结 | 第43-44页 |
| 第三章 肝癌组织核酸适配体的性质考察和初步应用研究 | 第44-56页 |
| 3.1 前言 | 第44页 |
| 3.2 实验部分 | 第44-47页 |
| 3.2.1 实验仪器与材料 | 第44-45页 |
| 3.2.2 共聚焦表征 | 第45-46页 |
| 3.2.3 流式细胞术表征 | 第46-47页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第47-55页 |
| 3.3.1 流式细胞术考察SW1对固定的肝癌SMMC-7721细胞的结合 | 第47-48页 |
| 3.3.2 荧光共定位考察SW1的结合位点 | 第48-49页 |
| 3.3.3 测定SW1与固定的SMMC-7721细胞的解离平衡常数 | 第49页 |
| 3.3.4 核酸酶处理考察SW1的结合靶分子是否为核酸 | 第49-50页 |
| 3.3.5 考察核酸适配体SW1与BC15是否结合同一位点 | 第50-51页 |
| 3.3.6 考察SW1对多种固定的癌细胞的结合情况 | 第51-52页 |
| 3.3.7 核酸适配体对不同分化程度的临床肝癌组织的识别能力 | 第52-53页 |
| 3.3.8 核酸适配体对临床肝癌组织的识别率 | 第53-54页 |
| 3.3.9 核酸适配体对不同器官来源的肿瘤组织的识别情况 | 第54-55页 |
| 3.4 小结 | 第55-56页 |
| 结论 | 第56-57页 |
| 附篇 胆管癌细胞QBC-939核酸适配体的筛选和序列优化 | 第57-62页 |
| 参考文献 | 第62-72页 |
| 附录A 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
